摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-15页 |
引言 | 第15-22页 |
第一部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞增殖的影响 | 第22-32页 |
1 材料、仪器与试剂 | 第22-24页 |
·癌细胞与药物 | 第22页 |
·主要试剂 | 第22页 |
·主要仪器设备 | 第22-23页 |
·主要工作液配制 | 第23-24页 |
·TCCT 药物母液 | 第23页 |
·磷酸盐缓冲液(PBS) | 第23页 |
·双抗储存液(1000×) | 第23页 |
·冻存液 | 第23页 |
·MTT 溶液 | 第23-24页 |
2 实验方法 | 第24-25页 |
·细胞培养 | 第24页 |
·细胞种板 | 第24页 |
·细胞加药 | 第24-25页 |
·细胞活性测定及显微镜拍照 | 第25页 |
·统计学处理 | 第25页 |
3 结果 | 第25-30页 |
·MTT | 第25-28页 |
·镜下观察 | 第28-30页 |
4 讨论 | 第30-32页 |
第二部分 TCCT 对 U251 与 A549 及细胞周期相关因子 mRNA 表达的影响 | 第32-39页 |
1 材料、仪器与试剂 | 第32-33页 |
·癌细胞与药物 | 第32页 |
·主要试剂 | 第32页 |
·主要仪器设备 | 第32-33页 |
2 实验方法 | 第33-36页 |
·细胞培养 | 第33页 |
·细胞种板 | 第33页 |
·细胞加药 | 第33-34页 |
·RNA 提取 | 第34页 |
·RNA 浓度及纯度检测 | 第34页 |
·RT-PCR | 第34-36页 |
·引物设计 | 第34-35页 |
·构建 PT-PCR 反应体系及反应程式,RT-PCR | 第35-36页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测 RT-PCR 产物 | 第36页 |
3 结果 | 第36-37页 |
4 讨论 | 第37-39页 |
第三部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞周期的影响 | 第39-49页 |
1 材料、仪器与试剂 | 第39-40页 |
·癌细胞与药物 | 第39页 |
·主要试剂 | 第39页 |
·主要仪器设备 | 第39-40页 |
2 实验方法 | 第40-41页 |
·细胞培养 | 第40页 |
·细胞种板 | 第40页 |
·细胞加药 | 第40-41页 |
·细胞固定 | 第41页 |
·PI 单染及上机检测 | 第41页 |
·统计学处理 | 第41页 |
3 结果 | 第41-48页 |
4 讨论 | 第48-49页 |
第四部分 TCCT 对 U251 与 A549 细胞凋亡的影响 | 第49-57页 |
1 材料、仪器与试剂 | 第49-50页 |
·癌细胞与药物 | 第49页 |
·主要试剂 | 第49页 |
·主要仪器设备 | 第49-50页 |
2 实验方法 | 第50-51页 |
·细胞培养 | 第50页 |
·细胞种板 | 第50页 |
·细胞加药 | 第50-51页 |
·细胞前处理及上机 | 第51页 |
·统计学处理 | 第51页 |
3 结果 | 第51-56页 |
4 讨论 | 第56-57页 |
第五部分 TCCT 对 U251 组蛋白乙酰化状态及细胞周期相关因子蛋白表达的影响 | 第57-65页 |
1 材料、仪器与试剂 | 第57-60页 |
·癌细胞与药物 | 第57页 |
·主要试剂 | 第57-58页 |
·主要仪器设备 | 第58页 |
·主要工作液配制 | 第58-60页 |
·1.0M Tris-HCl(pH6.8) | 第58页 |
·1.5M Tris-HCl(pH8.8) | 第58页 |
·30%储备胶溶液 | 第58页 |
·10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液 | 第58-59页 |
·10%过硫酸铵(AP)溶液 | 第59页 |
·5×SDS-PAGE 电泳缓冲液 | 第59页 |
·15%分离胶配方 | 第59页 |
·5%浓缩胶配制 | 第59页 |
·10×转移缓冲液 | 第59-60页 |
·20%吐温(Tween)20 溶液 | 第60页 |
·TBST 缓冲液 | 第60页 |
·封闭液(5%脱脂奶粉) | 第60页 |
2 实验方法 | 第60-63页 |
·细胞培养 | 第60页 |
·细胞种板 | 第60页 |
·细胞加药 | 第60-61页 |
·蛋白提取与定量 | 第61页 |
·蛋白提取 | 第61页 |
·蛋白定量 | 第61页 |
·Western Blot | 第61-63页 |
·灌制 SDS-PAGE 凝胶 | 第61页 |
·加样及电泳 | 第61-62页 |
·转膜 | 第62页 |
·封闭及抗体孵育 | 第62页 |
·发光、曝光及显影 | 第62-63页 |
3 结果 | 第63页 |
4 讨论 | 第63-65页 |
结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-70页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第70-71页 |
附录 缩略词表 | 第71-72页 |
致谢 | 第72页 |