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利用RNA干扰技术抑制洋桔梗ACC合酶基因表达的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-8页
第一章 前言第8-30页
 1 洋桔梗及其切花采后保鲜的研究第8-10页
   ·洋桔梗简介第8-9页
   ·洋桔梗切花采后的保鲜研究第9-10页
 2 ACC合酶基因的研究进展第10-15页
   ·植物体内乙烯的生物合成途径第10-12页
   ·乙烯合成中的关键酶第12页
   ·ACC合酶基因及其克隆的研究进展第12-14页
   ·抑制ACC合酶活性的基因工程策略及其展望第14-15页
 3 RNA干扰在植物基因工程中的应用第15-20页
   ·RNAi现象的发现第15-16页
   ·RNAi的作用机理第16-18页
   ·RNAi的分子生物学特性第18页
   ·RNAi在植物基因工程中的应用第18-19页
   ·RNAi技术存在的问题及其展望第19-20页
 4 聚合酶链式反应(PCR)检测技术在转基因植物研究中的运用第20-28页
   ·外源基因整合水平上的PCR检测第20-21页
   ·外源基因转录水平上的RT-PCR检测第21-28页
 5 本研究的思路、目的和意义第28-30页
第二章 重组子pCAMBIA1301-gfp-(GUS+ACS)i-NPTⅡ化根癌农杆菌及其侵染洋桔梗第30-43页
 1 材料与方法第30-37页
   ·材料第30-32页
   ·方法第32-37页
     ·大肠杆菌质粒的提取和鉴定第32-34页
     ·pCAMBIA1301-gfp-(GUS+ACS)i-NPTⅡ转化农杆菌LBA4404第34-35页
     ·重组菌落的鉴定与保存第35-36页
     ·洋桔梗叶片的预培养第36页
     ·农杆菌的活化与培养第36-37页
     ·采用叶盘法转化洋桔梗第37页
 2 结果与分析第37-42页
   ·大肠杆菌质粒的提取第37-38页
   ·大肠杆菌质粒浓度的测定第38-39页
   ·大肠杆菌质粒的PCR鉴定第39页
   ·农杆菌LBA4404转化子的PCR鉴定第39-40页
   ·洋桔梗叶片抗性芽的生长培养第40-42页
 3 讨论第42-43页
第三章 转化洋桔梗植株的检测第43-60页
 1 材料与方法第43-50页
   ·材料第43-44页
   ·方法第44-50页
     ·抗性苗的生根筛选培养第44页
     ·抗性苗的PCR检测第44-45页
     ·抗性苗的RT-PCR鉴定第45-47页
     ·抗性苗的GFP荧光观察第47页
     ·洋桔梗总蛋白质的提取第47页
     ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白的相对分子质量第47-50页
 2 结果与分析第50-57页
   ·抗性苗的生根筛选培养第50-51页
   ·抗性苗的PCR检测第51-53页
   ·抗性苗的RT-PCR鉴定第53-55页
   ·抗性苗的GFP荧光观察第55-56页
   ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测第56-57页
 3 讨论第57-60页
第四章 洋桔梗转基因组培苗的花期研究第60-65页
 1 材料和方法第60-62页
   ·材料第60-61页
   ·方法第61-62页
     ·洋桔梗组培苗的移栽方法第61页
     ·组培苗根的条数对移栽成活率的影响第61页
     ·移栽洋桔梗的花期统计第61页
     ·实验数据的统计分析第61-62页
 2 结果与分析第62-64页
   ·洋桔梗组培苗根的条数对移栽成活率的影响第62页
   ·空白洋桔梗、反义ACS洋桔梗、干扰ACSi洋桔梗的花期研究第62-64页
 3 讨论第64-65页
全文结论第65-66页
参考文献第66-76页
附录第76-81页
 附录1 主要缩略词表第76-77页
 附录2 MS培养基的配方第77-78页
 附录3 主要试剂的配制方法第78-79页
 附录4 植物基因组DNA提取试剂盒说明第79-80页
 附录5 发表的科研论文第80-81页
致谢第81页

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