蛋白质的理化性质对山羊β-防御素抗菌活性的影响
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文縮略词表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 防御素及其种类 | 第12-15页 |
| ·α-防御素 | 第12-13页 |
| ·β-防御素 | 第13-14页 |
| ·θ-防御素 | 第14页 |
| ·昆虫防御素 | 第14页 |
| ·植物防御素 | 第14-15页 |
| 2 防御素的生物学活性 | 第15-17页 |
| ·抗细菌活性 | 第15页 |
| ·抗真菌活性 | 第15-16页 |
| ·抗病毒活性 | 第16页 |
| ·抗癌作用 | 第16页 |
| ·免疫调节作用 | 第16页 |
| ·细胞毒作用 | 第16-17页 |
| ·其他生物活性 | 第17页 |
| 3 防御素作用机理 | 第17页 |
| 4 影响防御素抗菌活性的构效关系 | 第17-18页 |
| 5 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 山羊β-防御素基因的体外改造 | 第19-29页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 试验材料 | 第19页 |
| ·基因序列 | 第19页 |
| ·分析工具 | 第19页 |
| 3 试验方法 | 第19-21页 |
| ·防御素替换序列的获得 | 第19-20页 |
| ·改造防御素理化性质的预测 | 第20-21页 |
| ·预测数据的SAS分析及序列的筛选 | 第21页 |
| 4 结果与分析 | 第21-28页 |
| ·替换数据库的构建 | 第21-23页 |
| ·替换后防御素的理化性质预测 | 第23-24页 |
| ·SAS分析结果的方差分析 | 第24-25页 |
| ·正态分布分析及序列的选择 | 第25-28页 |
| 5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 山羊DGBD基因表达载体的构建和鉴定 | 第29-57页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 试验材料 | 第29-32页 |
| ·质粒、菌株 | 第29-30页 |
| ·主要药品及试剂 | 第30页 |
| ·常用试剂的配制 | 第30-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| 3 试验方法 | 第32-42页 |
| ·DGBD基因的合成 | 第32-34页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·DGBD基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·DGBD基因的克隆检测 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第34-38页 |
| ·表达载体pPICZαA的制备 | 第34-35页 |
| ·表达载体pPICZαA双酶切鉴定 | 第35页 |
| ·DGBD PCR纯化产物双酶切 | 第35-36页 |
| ·双酶切产物的连接 | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36-37页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第37-38页 |
| ·双酶切鉴定 | 第37页 |
| ·测序鉴定 | 第37-38页 |
| ·DGBD在毕赤酵母中的表达 | 第38-41页 |
| ·重组质粒线性化 | 第38页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·线性化片段电转GS115 | 第39页 |
| ·阳性转化子的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第41页 |
| ·抑菌试验 | 第41-42页 |
| ·防御素最低抑菌浓度试验 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖孔穴扩散法 | 第42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-55页 |
| ·DGBD的PCR扩增和序列分析 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第43-46页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·测序鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒线性化检测 | 第46-47页 |
| ·蛋白浓度检测结果 | 第47-48页 |
| ·抑菌结果检测 | 第48-55页 |
| ·十二株细菌的标准曲线 | 第48-50页 |
| ·改造防御素的MIC实验结果 | 第50-52页 |
| ·改造防御素的琼脂糖孔穴扩散法实验结果 | 第52-54页 |
| ·回归分析 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 全文结论 | 第57-58页 |
| 1 主要研究结果 | 第57页 |
| 2 值得进一步研究的相关问题 | 第57-58页 |
| 关键词索引 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
