| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 氨基酸及其缩写 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 鱼类抗菌肽的研究进展 | 第12-15页 |
| ·抗菌肽的发现及其特性 | 第12页 |
| ·抗菌肽的抗菌机理 | 第12-14页 |
| ·鱼类抗菌肽的功能 | 第14-15页 |
| 2 鱼类Hepcidin研究进展 | 第15-22页 |
| ·鱼类Hepcidin的基因结构及组织分布 | 第15-16页 |
| ·鱼类Hepcidin对微生物及肿瘤细胞的活性 | 第16-18页 |
| ·鱼类Hepcidin的抗细菌活性 | 第16-17页 |
| ·鱼类Hepcidin的抗病毒活性 | 第17页 |
| ·鱼类Hepcidin的抗肿瘤细胞活性 | 第17-18页 |
| ·鱼类Hepcidin的免疫调节功能 | 第18-19页 |
| ·鱼类Hepcidin的铁调节功能 | 第19-22页 |
| ·生物体的铁调节 | 第19-20页 |
| ·Hepcidin与铁调节 | 第20页 |
| ·Hepcidin与细菌感染和铁调节 | 第20-22页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 团头鲂Hepcidin基因的克隆及序列分析 | 第23-34页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·试验鱼、菌体与载体 | 第23页 |
| ·主要实验试剂 | 第23-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-27页 |
| ·Trizol法提取总RNA | 第24页 |
| ·cDNA第一条链的合成及PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第25-26页 |
| ·克隆质粒的构建与筛选 | 第26-27页 |
| ·重组克隆质粒的PCR鉴定及测序 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-32页 |
| ·团头鲂肝脏组织总RNA提取结果 | 第27页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因的RT-PCR结果 | 第27-29页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因克隆质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因的序列分析 | 第29-32页 |
| ·团头鲂Hepcidin核苷酸序列分析 | 第29-30页 |
| ·团头鲂Hepcidin氨基酸序列分析 | 第30-32页 |
| ·团头鲂Hepcidin系统进化分析 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 团头鲂Hepcidin基因的原核表达与真核表达 | 第34-50页 |
| 1 材料 | 第34-35页 |
| ·菌体与载体 | 第34页 |
| ·主要实验试剂 | 第34-35页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-43页 |
| ·原核重组表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| ·目的基因的PCR扩增及纯化 | 第35-36页 |
| ·表达载体质粒的提取 | 第36页 |
| ·目的基因与表达载体pGEX-KG的双酶切 | 第36-37页 |
| ·目的基因与原核表达载体的连接与转化 | 第37-38页 |
| ·原核重组表达质粒的PCR鉴定及测序 | 第38页 |
| ·原核重组表达质粒的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·原核重组表达质粒转化至表达菌株BL21(DE3) | 第38页 |
| ·原核重组蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析及活性鉴定 | 第39页 |
| ·真核重组表达质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·目的基因的PCR扩增及纯化 | 第39页 |
| ·表达载体质粒的提取 | 第39页 |
| ·目的基因与表达载体pPICZαA的双酶切 | 第39-40页 |
| ·目的基因与真核表达载体的连接与转化 | 第40页 |
| ·重组真核表达质粒的PCR鉴定及测序 | 第40-41页 |
| ·重组真核表达质粒在毕赤酵母中的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·重组表达质粒pPICZαA-Hepcidin的提取及线性化 | 第41页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·线性化重组质粒电转化至酵母感受态细胞 | 第42页 |
| ·阳性酵母菌株的筛选及诱导表达 | 第42页 |
| ·诱导表达蛋白的体外抑菌实验 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| ·原核重组表达质粒的构建与蛋白的诱导表达 | 第43-45页 |
| ·原核重组表达质粒pGEX-KG-Hepcidin的双酶切结果 | 第43-44页 |
| ·原核重组表达质粒pGEX-KG-Hepcidin的测序鉴定 | 第44页 |
| ·原核诱导表达蛋白的SDS-PAGE分析及活性分析 | 第44-45页 |
| ·真核重组表达载体的构建与蛋白的诱导表达 | 第45-48页 |
| ·真核重组表达质粒pPICZαA-Hepcidin的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·真核重组表达质粒pPICZαA-Hepcidin的测序鉴定 | 第46页 |
| ·阳性重组酵母菌落的PCR鉴定 | 第46页 |
| ·酵母诱导表达产物抗菌活性鉴定 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 团头鲂Hepcidin铁调节生物活性的研究 | 第50-59页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| ·供试菌株 | 第50页 |
| ·试验鱼与试验条件 | 第50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·实验分组 | 第51页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因的组织分布 | 第51-52页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因表达量的变化 | 第52页 |
| ·团头鲂肝脏组织铁含量测定 | 第52页 |
| ·血清铁含量测定 | 第52-53页 |
| ·数据分析 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·RNA质量的检测 | 第53页 |
| ·团头鲂Hepcidin基因的组织分布 | 第53页 |
| ·团头鲂感染嗜水气单胞菌后Hepcidin基因表达量的变化 | 第53-54页 |
| ·团头鲂感染嗜水气单胞菌后血清铁含量的变化 | 第54页 |
| ·团头鲂感染嗜水气单胞菌后肝脏组织铁含量的变化 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录 | 第67-72页 |
| 硕士期间研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
