| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·冠状病毒概述 | 第13-20页 |
| ·冠状病毒结构 | 第13-15页 |
| ·冠状病毒各蛋白的功能 | 第15-18页 |
| ·冠状病毒生命周期与基因组复制 | 第18-20页 |
| ·冠状病毒流行病学及研究现状 | 第20页 |
| ·中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)概述 | 第20-29页 |
| ·MERS-CoV结构 | 第21-22页 |
| ·MERS-CoV的发现、命名与分类 | 第22-25页 |
| ·MERS-CoV致病机理 | 第25-26页 |
| ·MERS-CoV系统发育与流行病学 | 第26-27页 |
| ·MERS-CoV宿主分析 | 第27-28页 |
| ·MERS-CoV研究现状 | 第28-29页 |
| ·MERS-CoV功能性受体CD26的功能简述 | 第29-31页 |
| 第二章 MERS-CoV RBD的发现、鉴定和结构解析 | 第31-57页 |
| ·引言 | 第31-33页 |
| ·实验材料 | 第33-39页 |
| ·主要化学试剂 | 第33页 |
| ·细胞系,质粒载体 | 第33-34页 |
| ·其他实验材料 | 第34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34页 |
| ·常用溶液配方 | 第34-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·重组基因的设计合成 | 第39-40页 |
| ·应用位点特异性重组策略克隆重组基因至重组昆虫杆状病毒载体Bacmid | 第40页 |
| ·Bacmid转染昆虫细胞Sf9及重组杆状病毒的扩增 | 第40-41页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·用确认了滴度的病毒感染昆虫细胞表达蛋白及蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白晶体生长条件的筛选 | 第43页 |
| ·重金属原子结合法Native-page | 第43页 |
| ·蛋白晶体数据收集及晶体结构解析 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-51页 |
| ·MERS-CoV RBD的鉴定 | 第44-46页 |
| ·MERS-CoV RBD蛋白的表达与纯化 | 第46-49页 |
| ·RBD蛋白晶体生长条件的筛选 | 第49页 |
| ·MERS-CoV RBD的重原子结合实验 | 第49-50页 |
| ·MERS-CoV RBD蛋白的结晶,数据收集和处理 | 第50-51页 |
| ·分析与结论 | 第51-56页 |
| ·MERS-CoV RBD整体结构 | 第51-54页 |
| ·MERS-CoV RBD与典型的β-冠状病毒S蛋白同源区的比较 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 MERS-CoV RBD与受体CD26相互作用机制的研究 | 第57-83页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-63页 |
| ·MERS-CoV RBD蛋白的表达和纯化 | 第58页 |
| ·CD26蛋白的表达和纯化 | 第58-61页 |
| ·MERS-CoV RBD和CD26的体外结合 | 第61页 |
| ·SPR测定MERS-CoV RBD与CD26分子间亲和力 | 第61-62页 |
| ·MERS-CoV RBD和CD26的共结晶 | 第62页 |
| ·复合物蛋白晶体生长条件的筛选 | 第62页 |
| ·复合物晶体X射线衍射数据收集与晶体结构解析 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-74页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第63-69页 |
| ·MERS-CoV RBD与CD26的体外结合 | 第69-70页 |
| ·MERS-CoV RBD与CD26的亲和力测定 | 第70-71页 |
| ·MERS-CoV RBD和CD26共结晶 | 第71页 |
| ·MERS-CoV RBD/CD26复合体晶体X射线衍射和晶体数据收集 | 第71-72页 |
| ·流式细胞仪检测验证MERS-CoV RBD与CD26的结合特征 | 第72-74页 |
| ·分析与讨论 | 第74-81页 |
| ·重组杆状病毒在扩增和表达蛋白过程中感染量的控制 | 第74页 |
| ·MERS-CoV RBD和CD26复合物整体结构特点 | 第74-76页 |
| ·MERS-CoV RBD结合受体前后结构比对 | 第76-77页 |
| ·MERS-CoV RBD与CD26结合接触面的特点 | 第77-80页 |
| ·与其他冠状病毒S蛋白/受体复合物的结构比较 | 第80-81页 |
| ·本章小结 | 第81-83页 |
| 第四章 MERS-CoV NTD和SARS-CoV NTD结构与功能的初探 | 第83-97页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·实验材料 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-87页 |
| ·NTD重组基因的设计合成 | 第84-86页 |
| ·利用糖点阵(Glycans microarray)技术测定蛋白和受体的结合特异性 | 第86-87页 |
| ·实验结果 | 第87-97页 |
| ·MERS-CoV NTD和SARS-CoV NTD重组基因的构建 | 第87-89页 |
| ·MERS-CoV NTD重组蛋白的表达与纯化 | 第89-90页 |
| ·SARS-CoV NTD重组蛋白的表达与纯化 | 第90-91页 |
| ·NTD蛋白晶体生长条件的筛选 | 第91-93页 |
| ·重金属原子结合法Native-page | 第93-94页 |
| ·蛋白晶体X-射线衍射与数据收集 | 第94页 |
| ·糖点阵实验分析 | 第94-95页 |
| ·分析与结论 | 第95-97页 |
| 第五章 其他工作 | 第97-109页 |
| ·第一部分 | 第97-103页 |
| ·蝙蝠来源的SARS-样冠状病毒刺突蛋白受体结合区的结构特征研究 | 第97-98页 |
| ·实验材料 | 第98页 |
| ·实验方法 | 第98-99页 |
| ·实验结果 | 第99-103页 |
| ·第二部分 | 第103-109页 |
| ·MERS-CoV S1蛋白、S1P(NTD-RBD)蛋白以及S-胞外段蛋白的研究初探 | 第103页 |
| ·实验结果 | 第103-109页 |
| 第六章 全文总结与课题展望 | 第109-113页 |
| ·全文总结 | 第109-110页 |
| ·课题展望 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-123页 |
| 作者简历 | 第123-125页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第123页 |
| 获奖情况 | 第123页 |
| 特别奖 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
