| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-33页 |
| ·玉米种子的储藏蛋白 | 第12-16页 |
| ·醇溶蛋白的分类及编码基因 | 第12-13页 |
| ·醇溶蛋白的分布 | 第13-15页 |
| ·影响蛋白体形成的因素 | 第15-16页 |
| ·玉米种子蛋白质的营养价值 | 第16-17页 |
| ·改善玉米种子蛋白质营养品质的研究进展 | 第17-27页 |
| ·高赖氨酸玉米的培育 | 第17-25页 |
| ·高甲硫氨酸玉米的培育 | 第25-27页 |
| ·玉米的遗传转化方法 | 第27-29页 |
| ·种子特异性启动子 | 第29-31页 |
| ·储藏蛋白来源的种子特异性启动子 | 第30-31页 |
| ·非储藏蛋白来源的种子特异性启动子 | 第31页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-58页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·实验菌株 | 第33页 |
| ·质粒载体 | 第33页 |
| ·各种酶及试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·实验中用到的引物 | 第34-36页 |
| ·常用培养基和溶液的配制 | 第36-38页 |
| ·常用培养基的配制 | 第36-37页 |
| ·常用溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·实验所需试剂的配制 | 第38-42页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·SDS法小量提取植物基因组DNA | 第39页 |
| ·玉米幼胚基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·His融合蛋白的表达纯化 | 第39页 |
| ·GST融合蛋白的表达纯化 | 第39-40页 |
| ·纯化蛋白的透析 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE | 第40页 |
| ·Western blot | 第40-41页 |
| ·基因枪转化 | 第41页 |
| ·玉米种子醇溶蛋白和非醇溶蛋白的提取 | 第41页 |
| ·凯氏定氮法测定玉米种子总蛋白含量 | 第41页 |
| ·茚三酮法测定玉米种子赖氨酸含量 | 第41页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第41-42页 |
| ·凝胶阻滞 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-58页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·质粒或连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| ·质粒对农杆菌感受态细胞的转化 | 第43页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第43页 |
| ·质粒的酶切和连接反应 | 第43-44页 |
| ·SDS法小量提取植物基因组DNA | 第44页 |
| ·基因组DNA的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·植物组织总RNA的提取 | 第45页 |
| ·RNA反转录、RT-PCR及qRT-PCR | 第45-46页 |
| ·融合蛋白的原核表达、纯化及透析 | 第46-47页 |
| ·Western blot | 第47-48页 |
| ·基因枪轰击洋葱表皮观察目标蛋白的定位 | 第48-49页 |
| ·农杆菌转化玉米幼胚及愈伤 | 第49-50页 |
| ·凯氏定氮法测定玉米种子总蛋白含量 | 第50-51页 |
| ·玉米种子赖氨酸含量的测定 | 第51-52页 |
| ·玉米种子醇溶蛋白和非醇溶蛋白的提取 | 第52页 |
| ·BCA法测定玉米醇溶蛋白和非醇溶蛋白的含量 | 第52-53页 |
| ·农杆菌转化拟南芥 | 第53页 |
| ·转基因拟南芥阳性苗的筛选 | 第53-54页 |
| ·不同时期的转基因拟南芥抗盐表型观察 | 第54页 |
| ·生理指标的测定 | 第54-55页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第55-57页 |
| ·Remorin蛋白的体外自聚与负染实验 | 第57页 |
| ·抗GhLRP多肽抗体的制备 | 第57-58页 |
| 第三章 高赖氨酸转GhLRP基因玉米的研究 | 第58-77页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·GhLRP基因的克隆及序列分析 | 第58-60页 |
| ·GhLRP蛋白的原核表达及亚细胞定位 | 第60-63页 |
| ·GhLRP蛋白的原核表达 | 第60-61页 |
| ·GhLRP蛋白的亚细胞定位 | 第61-63页 |
| ·转基因玉米的获得 | 第63-67页 |
| ·植物表达载体pSB130-GhLRP的构建 | 第63-64页 |
| ·农杆菌介导的玉米幼胚的遗传转化 | 第64-66页 |
| ·T_0代再生植株中GhLRP基因的PCR检测 | 第66页 |
| ·T_1代植株的分子检测 | 第66-67页 |
| ·转基因玉米后代分析 | 第67-70页 |
| ·T_1代转基因玉米种子赖氨酸及蛋白质含量的测定 | 第67-68页 |
| ·T_2、T_3及T_4代转基因玉米种子赖氨酸及蛋白质含量的测定 | 第68-69页 |
| ·T_3代转基因玉米种子中GhLRP表达水平的测定 | 第69-70页 |
| ·高赖氨酸转基因玉米品质性状的分析 | 第70-72页 |
| ·高赖氨酸转基因玉米种子不同蛋白成分的分析 | 第70-71页 |
| ·高赖氨酸转基因玉米种子油分和淀粉含量的分析 | 第71-72页 |
| ·高赖氨酸转基因玉米农艺性状的分析 | 第72-74页 |
| ·转基因株系的田间表现及室内考种 | 第72-73页 |
| ·转基因玉米的种子表型及萌发率分析 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 第四章 谷子高赖氨酸蛋白基因SiREM6的功能研究及对玉米的遗传转化 | 第77-108页 |
| ·前言 | 第77-80页 |
| ·SiREM6蛋白的功能研究 | 第80-98页 |
| ·SiREM6基因的克隆 | 第80页 |
| ·SiREM6蛋白的分析 | 第80-81页 |
| ·谷子Remorin蛋白的系统进化分析 | 第81-83页 |
| ·谷子SiREM1-SiREM11基因在逆境胁迫处理下的表达模式分析 | 第83-85页 |
| ·SiREM6蛋白的自聚分析 | 第85-87页 |
| ·SiREM6基因在不同组织中的表达模式分析 | 第87页 |
| ·SiREM6蛋白的亚细胞定位 | 第87-89页 |
| ·转基因拟南芥的获得 | 第89-90页 |
| ·转基因拟南芥在盐胁迫下的表型观察 | 第90-95页 |
| ·谷子SiREM6在体外可能受到SiARDP的正向调控 | 第95-98页 |
| ·SiREM6基因在玉米中的应用研究 | 第98-103页 |
| ·SiREM6基因改善玉米种子蛋白品质研究 | 第98-103页 |
| ·SiREM6基因在玉米抗盐方面的研究 | 第103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| ·结论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-120页 |
| 附录I | 第120-132页 |
| 附录II | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 个人简历 | 第136页 |
