| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 主要图表 | 第10-11页 |
| 主要英文缩写 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 1 材料与方法 | 第24-41页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·病料来源 | 第24页 |
| ·虫株、菌株、细胞、载体和试验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·弓形虫 LAMP 检测方法的建立 | 第27-31页 |
| ·组织 DNA 的提取 | 第27页 |
| ·PCR 扩增 | 第27页 |
| ·目的 DNA 片段的回收 | 第27-28页 |
| ·连接与转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 pMD-19T-529bp 的鉴定 | 第29页 |
| ·序列同源性分析以及突变区域分析 | 第29页 |
| ·LAMP 反应引物设计 | 第29-30页 |
| ·模板制备 | 第30页 |
| ·反应体系的建立与优化 | 第30-31页 |
| ·LAMP 产物的测序鉴定 | 第31页 |
| ·特异性检测 | 第31页 |
| ·敏感性检测 | 第31页 |
| ·ROP18 的原核表达 | 第31-36页 |
| ·弓形虫基因组 DNA 的提取 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第32页 |
| ·pET-32a-ROP18 重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达及初步鉴定 | 第33页 |
| ·表达形式的分析 | 第33页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第33-34页 |
| ·重组 ROP18 蛋白包涵体的纯化 | 第34页 |
| ·弓形虫 ROP18 蛋白鼠抗多克隆血清的制备 | 第34-35页 |
| ·重组 ROP18 蛋白的免疫印迹分析（Western-blot） | 第35-36页 |
| ·弓形虫 ROP18 的真核表达 | 第36-41页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·ROP18-Flag 的 PCR 扩增 | 第36页 |
| ·pcDNA3.1-ROP18-Flag 重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·pcDNA3.1-ROP18-Flag 的细胞表达 | 第37页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第37页 |
| ·真核表达产物免疫印迹分析 | 第37-38页 |
| ·pcDNA3.1-ROP18 重组质粒的大量提取 | 第38页 |
| ·试验动物分组与免疫 | 第38-39页 |
| ·抗体的检测 | 第39-40页 |
| ·攻虫试验 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-57页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第41页 |
| ·菌液 PCR 鉴定 | 第41-42页 |
| ·测序与同源性分析 | 第42页 |
| ·遗传进化树的构建 | 第42-43页 |
| ·序列突变分析 | 第43-44页 |
| ·LAMP 扩增结果 | 第44-45页 |
| ·添加环引物 | 第45页 |
| ·最佳反应体系和条件 | 第45页 |
| ·LAMP 与 PCR 的特异性 | 第45-46页 |
| ·LAMP 与 PCR 的敏感性 | 第46-47页 |
| ·测序结果 | 第47-48页 |
| ·ROP18 的 PCR 扩增 | 第48页 |
| ·pET-32a-ROP18 质粒的菌液 PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白 pET-32a- ROP18 的诱导表达与鉴定 | 第50页 |
| ·重组融合蛋白表达形式的分析 | 第50-51页 |
| ·重组表达蛋白纯化分析及含量测定 | 第51-52页 |
| ·重组表达蛋白免疫印迹分析（Western-blot） | 第52页 |
| ·ROP18-Flag 的 PCR 扩增 | 第52-53页 |
| ·pcDNA3.1-ROP18-Flag 的菌液 PCR 鉴定 | 第53页 |
| ·重组真核表达质粒的双酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·pcDNA3.1-ROP18-Flag 在 BHK-21 细胞内的表达 | 第54-55页 |
| ·表达产物的 Western -blot 检测 | 第55页 |
| ·最佳抗原抗体稀释度 | 第55页 |
| ·抗体滴度 | 第55页 |
| ·攻虫结果 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| ·弓形虫 LAMP 方法的建立 | 第57-58页 |
| ·弓形虫 ROP18 重组蛋白的原核表达 | 第58-59页 |
| ·ROP18 蛋白免疫保护力的研究 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
