猪流行性腹泻病毒COE抗原表位的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 主要符号列表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 引言 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·病料来源 | 第25页 |
| ·菌株、质粒与载体 | 第25页 |
| ·阴性血清及阳性血清 | 第25页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第25页 |
| ·主要试验仪器 | 第25页 |
| ·主要培养基及溶液的配制 | 第25-29页 |
| ·主要培养基 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE 检测所需溶液 | 第26-27页 |
| ·蛋白诱导表达及提纯所需溶液 | 第27-28页 |
| ·Western-blot 试验所用溶液 | 第28-29页 |
| ·ELISA 试验所用溶液 | 第29页 |
| ·COE 抗原表位的遗传变异分析 | 第29-33页 |
| ·COE 抗原表位的扩增 | 第29-30页 |
| ·COE 抗原表位的克隆与鉴定 | 第30-33页 |
| ·COE 抗原表位的原核表达及免疫原性分析 | 第33-36页 |
| ·重组质粒 pET-32α-COE 的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的诱导表达及初步鉴定 | 第34页 |
| ·重组蛋白诱导条件的优化 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的细胞定位分析 | 第35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·免疫印迹分析 | 第35-36页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第36-40页 |
| ·抗原包被浓度及一抗稀释度的确定 | 第36-37页 |
| ·抗原包被条件的确定 | 第37页 |
| ·封闭时间的确定 | 第37页 |
| ·一抗作用时间的确定 | 第37页 |
| ·二抗稀释度的确定 | 第37页 |
| ·二抗作用时间的确定 | 第37-38页 |
| ·显色时间的确定 | 第38页 |
| ·临界值的确定 | 第38页 |
| ·特异性的检验 | 第38页 |
| ·敏感性的检验 | 第38页 |
| ·重复性的检验 | 第38-39页 |
| ·符合率的检验 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-54页 |
| ·COE 抗原表位的 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·COE 抗原表位的克隆与鉴定 | 第40页 |
| ·COE 抗原表位的遗传变异分析 | 第40-42页 |
| ·重组表达质粒 pET-32α-COE 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒的 PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒的测序鉴定 | 第43页 |
| ·重组蛋白的诱导表达、鉴定及纯化 | 第43-45页 |
| ·重组蛋白的初步表达鉴定 | 第43页 |
| ·重组蛋白诱导条件的优化 | 第43页 |
| ·重组蛋白的细胞定位分析 | 第43页 |
| ·重组蛋白纯化分析及含量测定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白免疫印迹分析 | 第44-45页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第45-54页 |
| ·抗原最佳包被浓度及一抗最佳稀释度的确定 | 第45页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定 | 第45页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第45页 |
| ·一抗最佳作用时间的确定 | 第45页 |
| ·二抗最佳稀释度的确定 | 第45-46页 |
| ·二抗最佳作用时间的确定 | 第46页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第46-48页 |
| ·临界值的确定 | 第48-49页 |
| ·特异性的检验 | 第49页 |
| ·敏感性的检验 | 第49-51页 |
| ·重复性的检验 | 第51-52页 |
| ·符合率的检验 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·目的基因的选择 | 第54页 |
| ·目的蛋白的原核表达 | 第54页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹分析 | 第55-56页 |
| ·间接 ELISA 方法条件的优化 | 第56页 |
| ·间接 ELISA 方法判定标准的确定 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
| 在读期间发表的论文 | 第66页 |
