摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-14页 |
第一章 绪论 | 第14-26页 |
·套式病毒概述 | 第14-18页 |
·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)概述 | 第18-19页 |
·PRRSV 核衣壳蛋白(N)研究进展 | 第19-23页 |
·鼠肝炎病毒(MHV)及其辅助蛋白 ns2 研究进展 | 第23-26页 |
第二章 PRRSV 两基因型间 N 蛋白的嵌合体构建及其病毒学特性 | 第26-48页 |
·材料与方法 | 第26-40页 |
·结果 | 第40-46页 |
·PRRSV 两基因型 N 蛋白核苷酸和氨基酸序列比较分析 | 第40-41页 |
·嵌合 N 蛋白的病毒拯救 | 第41-42页 |
·嵌合 N 蛋白的表达鉴定 | 第42-43页 |
·嵌合病毒的生长特征 | 第43-44页 |
·嵌合病毒亚基因组的转录分析 | 第44-46页 |
·嵌合病毒的遗传稳定性 | 第46页 |
·讨论 | 第46-48页 |
第三章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白半胱氨酸功能研究 | 第48-61页 |
·材料与方法 | 第48-55页 |
·结果 | 第55-60页 |
·PRRSV 两基因型 N 蛋白的半胱氨酸突变体构建 | 第55-56页 |
·北美型 N 蛋白第 90 位半胱氨酸对病毒感染性是非必须的 | 第56页 |
·北美型 N 蛋白的所有半胱氨酸对病毒感染性是非必须的 | 第56-58页 |
·欧洲型 N 蛋白的所有半胱氨酸对病毒感染性是非必须的 | 第58-59页 |
·两基因型 N 蛋白半胱氨酸突变体的遗传稳定性 | 第59-60页 |
·讨论 | 第60-61页 |
第四章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白二聚化体外生化研究 | 第61-72页 |
·材料与方法 | 第61-66页 |
·结果 | 第66-70页 |
·NEM 可以阻止病毒感染的细胞内 N 蛋白二聚体形成 | 第66-67页 |
·NEM 可以阻止真核质粒转染表达的细胞内 N 蛋白二聚体形成 | 第67-68页 |
·细胞裂解前经 NEM 预处理可以阻止 N 蛋白二聚体形成 | 第68页 |
·细胞裂解物在低 pH 值下可以阻止 N 蛋白二聚体形成 | 第68-69页 |
·未经 NEM 处理的胞外病毒粒子有 N 蛋白二聚体形成 | 第69页 |
·NEM 不能阻止胞外病毒粒子 N 蛋白二聚体形成 | 第69-70页 |
·讨论 | 第70-72页 |
第五章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白相互作用的 BiFC 研究 | 第72-85页 |
·材料与方法 | 第72-77页 |
·结果 | 第77-82页 |
·Venus 突变体的构建 | 第77页 |
·VN 与 VC 截短片段的构建 | 第77-78页 |
·PRRSV N 蛋白的插入与验证 | 第78-79页 |
·细胞骨架蛋白α-tubulin 的插入与验证 | 第79页 |
·PRRSV 两基因型的全长 N 蛋白相互作用的 BiFC 检测 | 第79-80页 |
·PRRSV 两基因型的截短 N 蛋白相互作的 BiFC 检测 | 第80-82页 |
·讨论 | 第82-85页 |
第六章 MHV 辅助蛋白 ns2 的同源蛋白结构与功能研究 | 第85-96页 |
·材料与方法 | 第85-89页 |
·结果 | 第89-94页 |
·MHV ns2 与轮状病毒 VP3 存在同源结构 | 第89-90页 |
·表达纯化的 VP3 有切割 2-5A 活性 | 第90页 |
·瞬时表达的 VP3 在细胞内可降解 2-5A | 第90-91页 |
·嵌合 VP3 的 MHV 在体外可补偿 ns2 功能 | 第91-94页 |
·嵌合 VP3 的 MHV 在体内可补偿 ns2 功能 | 第94页 |
·讨论 | 第94-96页 |
第七章 全文总结 | 第96-97页 |
参考文献 | 第97-109页 |
附录 | 第109-110页 |
致谢 | 第110-111页 |
作者简介 | 第111页 |