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基于反向遗传平台的套式病毒蛋白结构与功能研究

摘要第1-8页
Abstract第8-14页
第一章 绪论第14-26页
   ·套式病毒概述第14-18页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)概述第18-19页
   ·PRRSV 核衣壳蛋白(N)研究进展第19-23页
   ·鼠肝炎病毒(MHV)及其辅助蛋白 ns2 研究进展第23-26页
第二章 PRRSV 两基因型间 N 蛋白的嵌合体构建及其病毒学特性第26-48页
   ·材料与方法第26-40页
   ·结果第40-46页
     ·PRRSV 两基因型 N 蛋白核苷酸和氨基酸序列比较分析第40-41页
     ·嵌合 N 蛋白的病毒拯救第41-42页
     ·嵌合 N 蛋白的表达鉴定第42-43页
     ·嵌合病毒的生长特征第43-44页
     ·嵌合病毒亚基因组的转录分析第44-46页
     ·嵌合病毒的遗传稳定性第46页
   ·讨论第46-48页
第三章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白半胱氨酸功能研究第48-61页
   ·材料与方法第48-55页
   ·结果第55-60页
     ·PRRSV 两基因型 N 蛋白的半胱氨酸突变体构建第55-56页
     ·北美型 N 蛋白第 90 位半胱氨酸对病毒感染性是非必须的第56页
     ·北美型 N 蛋白的所有半胱氨酸对病毒感染性是非必须的第56-58页
     ·欧洲型 N 蛋白的所有半胱氨酸对病毒感染性是非必须的第58-59页
     ·两基因型 N 蛋白半胱氨酸突变体的遗传稳定性第59-60页
   ·讨论第60-61页
第四章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白二聚化体外生化研究第61-72页
   ·材料与方法第61-66页
   ·结果第66-70页
     ·NEM 可以阻止病毒感染的细胞内 N 蛋白二聚体形成第66-67页
     ·NEM 可以阻止真核质粒转染表达的细胞内 N 蛋白二聚体形成第67-68页
     ·细胞裂解前经 NEM 预处理可以阻止 N 蛋白二聚体形成第68页
     ·细胞裂解物在低 pH 值下可以阻止 N 蛋白二聚体形成第68-69页
     ·未经 NEM 处理的胞外病毒粒子有 N 蛋白二聚体形成第69页
     ·NEM 不能阻止胞外病毒粒子 N 蛋白二聚体形成第69-70页
   ·讨论第70-72页
第五章 PRRSV 两基因型的 N 蛋白相互作用的 BiFC 研究第72-85页
   ·材料与方法第72-77页
   ·结果第77-82页
     ·Venus 突变体的构建第77页
     ·VN 与 VC 截短片段的构建第77-78页
     ·PRRSV N 蛋白的插入与验证第78-79页
     ·细胞骨架蛋白α-tubulin 的插入与验证第79页
     ·PRRSV 两基因型的全长 N 蛋白相互作用的 BiFC 检测第79-80页
     ·PRRSV 两基因型的截短 N 蛋白相互作的 BiFC 检测第80-82页
   ·讨论第82-85页
第六章 MHV 辅助蛋白 ns2 的同源蛋白结构与功能研究第85-96页
   ·材料与方法第85-89页
   ·结果第89-94页
     ·MHV ns2 与轮状病毒 VP3 存在同源结构第89-90页
     ·表达纯化的 VP3 有切割 2-5A 活性第90页
     ·瞬时表达的 VP3 在细胞内可降解 2-5A第90-91页
     ·嵌合 VP3 的 MHV 在体外可补偿 ns2 功能第91-94页
     ·嵌合 VP3 的 MHV 在体内可补偿 ns2 功能第94页
   ·讨论第94-96页
第七章 全文总结第96-97页
参考文献第97-109页
附录第109-110页
致谢第110-111页
作者简介第111页

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