| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| ·研究背景 | 第12-13页 |
| ·小分子热休克蛋白研究进展 | 第13-22页 |
| ·小分子热休克蛋白的概述 | 第13-14页 |
| ·小分子热休克蛋白的生物学作用 | 第14-17页 |
| ·小分子热休克蛋白的结构特点及与功能的关系 | 第17-19页 |
| ·小分子热休克蛋白与寄生虫感染 | 第19-22页 |
| 2 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·试验材料 | 第23-27页 |
| ·虫株、血清和试验动物 | 第23页 |
| ·质粒和菌株 | 第23页 |
| ·酶和主要试剂 | 第23-25页 |
| ·抗生素和培养基的配制 | 第25页 |
| ·主要溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·仪器和设备 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-37页 |
| ·生物信息学分析方法和工具 | 第27-28页 |
| ·引物的设计 | 第28页 |
| ·东方巴贝斯虫基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20基因的扩增和克隆测序 | 第28-30页 |
| ·系统进化分析 | 第30-31页 |
| ·东方巴贝斯虫总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增东方巴贝斯虫HSP20基因的ORF | 第31-32页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20蛋白表达 | 第33-34页 |
| ·表达产物的大量提取和纯化 | 第34页 |
| ·Western blot试验 | 第34-35页 |
| ·ELISA检测实验牛血清抗体水平 | 第35页 |
| ·多抗血清的制备和间接免疫荧光试验 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌存活率实验 | 第36页 |
| ·HSP20蛋白对BSA化学变性保护作用的测定 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-56页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20基因的克隆及分析 | 第37-45页 |
| ·HSP20基因的PCR扩增 | 第37页 |
| ·HSP20基因序列的测定 | 第37-39页 |
| ·HSP20基因内含子的确定 | 第39-41页 |
| ·HSP20序列的比对和分子进化分析 | 第41-42页 |
| ·HSP20序列的生物信息学分析 | 第42-45页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20蛋白的表达、纯化及抗原性 | 第45-52页 |
| ·HSP20基因ORF的扩增 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pMD19-T-BoHSP20的构建和酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒pET-28a-BoHSP20的构建和酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·HSP20蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·表达产物存在形式 | 第48-49页 |
| ·表达条件的优化 | 第49-50页 |
| ·HSP20蛋白的纯化及抗原性分析 | 第50-52页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20的免疫原性分析 | 第52-53页 |
| ·东方巴贝斯虫的免疫荧光定位 | 第52页 |
| ·牛血清抗体水平检测 | 第52-53页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20分子伴侣活性检测 | 第53-56页 |
| ·HSP20的表达对大肠杆菌存活率的影响 | 第53-54页 |
| ·HSP20对BSA化学变性的保护作用 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-60页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20基因克隆及序列分析 | 第56-57页 |
| ·东方巴贝斯虫HSP20蛋白的表达和功能验证 | 第57-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
