| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·几丁质 | 第12页 |
| ·几丁质酶 | 第12-13页 |
| ·昆虫几丁质酶 | 第13-19页 |
| ·昆虫几丁质酶的性质 | 第13-14页 |
| ·昆虫几丁质酶的主要功能 | 第14页 |
| ·昆虫几丁质酶基因氨基酸同源性分析 | 第14页 |
| ·昆虫几丁质酶氨基酸结构及蛋白结构特点 | 第14-15页 |
| ·昆虫几丁质酶的分类 | 第15-18页 |
| ·昆虫体内几丁质酶基因的时空表达 | 第18-19页 |
| ·昆虫几丁质酶基因在植物抗虫方面的应用潜力 | 第19-21页 |
| ·昆虫几丁质酶和Bt的协同作用 | 第19页 |
| ·昆虫几丁质酶基因在转基因作物中的应用 | 第19-20页 |
| ·重组昆虫几丁质酶基因的杆状病毒在抗虫研究中的应用 | 第20页 |
| ·昆虫几丁质酶在防治害虫方面的直接应用 | 第20-21页 |
| ·重要农业害虫—舞毒蛾简介 | 第21页 |
| ·杆状病毒-昆虫细胞表达系统 | 第21-22页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第22页 |
| ·本研究课题的来源及主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 舞毒蛾和棉铃虫的人工饲养 | 第24-26页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·虫体来源 | 第24页 |
| ·饲料配制 | 第24页 |
| ·舞毒蛾的饲养 | 第24-25页 |
| ·棉铃虫的饲养 | 第25-26页 |
| 第三章 舞毒蛾几丁质酶基因的克隆 | 第26-40页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·实验虫体、载体、感受态、引物 | 第26页 |
| ·试剂盒、工具酶及其他生化试剂 | 第26页 |
| ·溶液配置 | 第26页 |
| ·设备与仪器 | 第26-28页 |
| ·试验方法 | 第28-37页 |
| ·总RNA提取 | 第28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·保守域序列获得 | 第29-31页 |
| ·3’端序列获得 | 第31-32页 |
| ·5’端序列获得 | 第32-34页 |
| ·舞毒蛾几丁质酶基因开放阅读框的获得 | 第34-35页 |
| ·Blunt-LdCht5载体的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第四章 舞毒蛾几丁质酶基因生物信息学分析 | 第40-52页 |
| ·cDNA序列分析 | 第41-42页 |
| ·核苷酸、氨基酸序列组成和理化性质分析 | 第41页 |
| ·利用BLAST软件进行序列相似性检索 | 第41-42页 |
| ·蛋白质信息学分析 | 第42-51页 |
| ·疏水性分析 | 第42-43页 |
| ·信号肽分析 | 第43-44页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第44-45页 |
| ·糖基化、磷酸化修饰位点分析 | 第45-46页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第46-47页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第47页 |
| ·蛋白质功能区预测 | 第47-48页 |
| ·30种昆虫几丁质酶基因的系统进化树构建 | 第48-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第五章 舞毒蛾几丁质酶基因的真核表达及重组病毒的获得 | 第52-72页 |
| ·实验材料 | 第52-54页 |
| ·实验载体、细胞及试虫来源 | 第52页 |
| ·分子生物学用酶、试剂盒及试剂 | 第52页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·试验方法 | 第54-63页 |
| ·Sf9细胞的培养 | 第54-55页 |
| ·在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中表达舞毒蛾几丁质酶 | 第55-59页 |
| ·真核表达的舞毒蛾几丁质酶的活性测定 | 第59-62页 |
| ·重组杆状病毒AcMNPV-LdCht5的获得 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-71页 |
| ·目的片段的获得 | 第63-64页 |
| ·供体质粒酶切鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组穿梭载体PCR鉴定 | 第65页 |
| ·转染Sf9细胞 | 第65-66页 |
| ·重组病毒鉴定 | 第66-67页 |
| ·几丁质酶酶活标准曲线测定 | 第67页 |
| ·舞毒蛾几丁质酶的活性测定 | 第67-68页 |
| ·感染病毒的细胞表达目的蛋白的量与时间的关系 | 第68页 |
| ·硫酸铵沉淀目的蛋白的最佳浓度测定 | 第68-69页 |
| ·舞毒蛾几丁质酶真核表达的粗蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| ·棉铃虫幼虫体内增殖重组病毒 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第六章 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文与专利 | 第82页 |
