| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一篇 研究综述 | 第14-28页 |
| 1 性别决定基因研究进展 | 第14-19页 |
| ·Zfy基因 | 第14-16页 |
| ·Sry基因 | 第16-17页 |
| ·Sox-9基因 | 第17-18页 |
| ·Gata-4基因 | 第18页 |
| ·Sf-1基因 | 第18-19页 |
| ·Wt-1基因 | 第19页 |
| ·总结和展望 | 第19页 |
| 2 病毒载体介导RNA干扰的研究进展 | 第19-26页 |
| ·病毒载体系统简介 | 第20-23页 |
| ·稳定RNA干扰载体 | 第23-24页 |
| ·高效RNA干扰载体 | 第24页 |
| ·诱导RNA干扰载体 | 第24-25页 |
| ·标记RNA干扰载体 | 第25页 |
| ·目的细胞特异性RNA干扰载体 | 第25-26页 |
| ·问题与展望 | 第26页 |
| 3 RNAi作用机制及RNAi技术在动物繁殖中的应用 | 第26-28页 |
| ·RNAi作用机制 | 第26-27页 |
| ·RNAi技术在动物繁殖中的应用 | 第27页 |
| ·展望 | 第27-28页 |
| 第二篇 实验研究 | 第28-51页 |
| 实验一：小鼠Zfy基因RNAi逆转录病毒载体的构建 | 第28-35页 |
| 1. 实验材料 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·载体、菌株及细胞 | 第29页 |
| 2. 实验方法 | 第29-32页 |
| ·重组逆转录病毒载体的构建 | 第29-31页 |
| ·逆转录病毒的包装与病毒滴度测定 | 第31-32页 |
| 3. 实验结果 | 第32-33页 |
| ·shRNA表达序列的设计与合成 | 第32页 |
| ·重组逆转录病毒表达载体的测序鉴定 | 第32页 |
| ·逆转录病毒包装及滴度测定 | 第32-33页 |
| 4. 讨论 | 第33-35页 |
| 实验二：逆转录病毒载体介导的RNAi体外调控Zfy基因表达的实验研究 | 第35-42页 |
| 1. 实验材料 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-38页 |
| ·Zfy基因RNA干扰逆转录病毒载体的构建及病毒包装 | 第36-37页 |
| ·重组RNAi质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA的大量制备与纯化 | 第37页 |
| ·小鼠生精细胞的分离培养 | 第37页 |
| ·逆转录病毒感染小鼠生精细胞及质粒载体转染小鼠生精细胞 | 第37-38页 |
| ·荧光实时定量PCR测定生精细胞中Zfy基因mRNA的表达水平 | 第38页 |
| 3. 实验结果 | 第38-40页 |
| ·小鼠生精细胞分离培养的形态学特征 | 第38-39页 |
| ·逆转录病毒载体对小鼠生精细胞的感染效果 | 第39页 |
| ·生精细胞中Zfy基因mRNA的表达水平 | 第39-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 实验三：调控Zfy基因表达对小鼠后代性别影响的实验研究 | 第42-51页 |
| 1. 实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| 2. 实验方法 | 第43-45页 |
| ·Zfy基因RNA干扰逆转录病毒载体的构建及病毒包装 | 第43页 |
| ·重组RNAi质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA的大量制备与纯化 | 第43-44页 |
| ·小鼠体内RNA干扰实验 | 第44页 |
| ·荧光实时定量PCR测定睾丸组织中Zfy基因mRNA的表达水平 | 第44-45页 |
| ·受孕雌鼠的饲养和后代小鼠的性别鉴定 | 第45页 |
| 3. 实验结果 | 第45-49页 |
| ·PCR产物扩增结果 | 第45-46页 |
| ·睾丸组织中Zfy基因mRNA的表达水平 | 第46-47页 |
| ·小鼠后代性别比例 | 第47-48页 |
| ·病毒载体和质粒载体在小鼠体内作用时间 | 第48-49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 全文小结 | 第51-52页 |
| 创新点 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-64页 |
| 导师评阅表 | 第64页 |
