| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写对照 | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 Fat - 1 基因 | 第13-14页 |
| ·Fat -1 基因来源及结构 | 第13页 |
| ·Fat -1 基因研究现状 | 第13-14页 |
| 2 不饱和脂肪酸脱氢酶的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 多不饱和脂肪酸 | 第16-19页 |
| ·多不和脂肪酸概述 | 第16页 |
| ·多不饱和脂肪酸研究进展 | 第16-17页 |
| ·ω- 3PUFAs 的生理作用 | 第17-19页 |
| ·临床作用 | 第17页 |
| ·对血管疾病作用 | 第17-18页 |
| ·ω- 3PUFAs 与抗癌作用 | 第18-19页 |
| ·ω- 3PUFAs 的测定方法研究进展 | 第19页 |
| 4 泛素启动子研究 | 第19-21页 |
| ·泛素启动子的结构 | 第19-20页 |
| ·泛素启动子的作用机制 | 第20页 |
| ·泛素启动子的研究现状 | 第20-21页 |
| 5 本课题研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 试验研究 | 第22-58页 |
| 试验1 萨福克羊成纤维细胞体外培养 | 第22-28页 |
| 摘要 | 第22页 |
| 1 材料和方法 | 第22-24页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·细胞来源 | 第22页 |
| ·主要试剂及培养液 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-24页 |
| ·萨福克羊成纤维细胞原代培养 | 第23页 |
| ·细胞分离培养及传代 | 第23-24页 |
| ·细胞的冻存 | 第24页 |
| ·细胞的复苏 | 第24页 |
| ·细胞对 G418 敏感度检测 | 第24页 |
| 2 试验结果与分析 | 第24-26页 |
| ·成纤维细胞体外生长状况及特征观察 | 第24-25页 |
| ·G418 敏感度检测 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 4 小结 | 第27-28页 |
| 试验2 UbB 启动子的功能验证 | 第28-35页 |
| 摘要 | 第28-29页 |
| 1 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·试验材料 | 第29页 |
| ·细胞来源 | 第29页 |
| ·质粒的和感受态细胞 | 第29页 |
| ·主要试验试剂和溶液配制 | 第29页 |
| ·主要试验仪器 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-32页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·启动子 UbB 的克隆 | 第30-31页 |
| ·UbB 序列的 PCR 扩增 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第30页 |
| ·PC R 产物回收及连接 T-easy Vector | 第30页 |
| ·连接产物转化 DH - 5α | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的筛选和初步鉴定 | 第31页 |
| ·UbB - pEGFP- c1 表达载体构建 | 第31页 |
| ·重组质粒提取 | 第31页 |
| ·双酶切、回收纯化及连接 | 第31页 |
| ·转染细胞和比较启动效率 | 第31-32页 |
| 2 试验结果 | 第32-33页 |
| ·启动子 PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·重组质粒 UbB- pEGFP - c1 酶切鉴定 | 第33页 |
| ·转染细胞和比较启动效率 | 第33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 4 小结 | 第34-35页 |
| 试验3 含 Fat - 1 基因表达载体的构建 | 第35-41页 |
| 摘要 | 第35页 |
| 1 试验材料与方法 | 第35-37页 |
| ·试验材料 | 第35-36页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第35-36页 |
| ·主要试剂、溶液和仪器设备 | 第36页 |
| ·试验方法 | 第36-37页 |
| ·Fat - 1 基因密码子优化 | 第36页 |
| ·表达载体构建 | 第36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增鉴定 | 第36-37页 |
| ·酶切鉴定 | 第37页 |
| ·测序鉴定 | 第37页 |
| 2 试验结果 | 第37-40页 |
| ·密码子使用频率分析 | 第37页 |
| ·重组质粒合成与鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组表达载体分子水平鉴定 | 第39-40页 |
| ·测序鉴定 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40页 |
| 4 小结 | 第40-41页 |
| 试验4 Fat -1 基因在绵羊成纤维细胞中的表达 | 第41-51页 |
| 摘要 | 第41-42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·细胞来源 | 第42页 |
| ·主要试剂及培养液 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-45页 |
| ·细胞准备 | 第42页 |
| ·脂质体转染 | 第42页 |
| ·细胞筛选 | 第42页 |
| ·纯化培养 | 第42-43页 |
| ·阳性细胞 DNA 水平鉴定 | 第43页 |
| ·阳性细胞 RNA 水平鉴定 | 第43-44页 |
| ·阳性细胞 RNA 提取 | 第43页 |
| ·反转录合成 cDNA (Reverse Transcription ，RT ) | 第43-44页 |
| ·RT - PCR 扩增 | 第44页 |
| ·脂肪酸含量测定 | 第44页 |
| ·细胞染色体数目分析 | 第44-45页 |
| 2 试验结果 | 第45-48页 |
| ·绵羊成纤维细胞的转染和筛选 | 第45-46页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第46页 |
| ·脂肪酸含量变化检测 | 第46-47页 |
| ·染色体数目形态分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 试验5 转 Fat - 1 基因克隆绵羊的制备 | 第51-58页 |
| 摘要 | 第51-52页 |
| 1 试验材料与方法 | 第52-54页 |
| ·试验材料 | 第52页 |
| ·供体与受体来源 | 第52页 |
| ·试验试剂和药品 | 第52页 |
| ·试验仪器 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-54页 |
| ·绵羊卵母细胞采集与体外成熟 | 第52页 |
| ·受体细胞的处理 | 第52页 |
| ·供体细胞的准备 | 第52-53页 |
| ·重构胚的制备 | 第53-54页 |
| ·去核 | 第53页 |
| ·移核 | 第53页 |
| ·融合 | 第53页 |
| ·融合胚的激活与发育培养 | 第53页 |
| ·胚胎移植 | 第53-54页 |
| ·B 超检查、产羔及接产 | 第54页 |
| ·转 oFat-1 基因克隆羊初步 PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·转基因绵羊成纤维细胞染色体数目分析 | 第54页 |
| 2 试验结果 | 第54-57页 |
| ·成熟卵母细胞的收获 | 第54页 |
| ·核移植制备重构胚 | 第54页 |
| ·胚胎移植、B 超妊娠确诊与产羔 | 第54-56页 |
| ·克隆羊 PCR 初步鉴定 | 第56页 |
| ·染色体数目分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57页 |
| 4 小结 | 第57-58页 |
| 全文结论及创新 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76-77页 |
