| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 1 引言 | 第14-36页 |
| ·基因组印迹和印迹基因 | 第14-19页 |
| ·基因组印迹的发现和印迹基因的鉴定 | 第14页 |
| ·基因组印迹和印迹基因的特点 | 第14-16页 |
| ·基因组印迹的进化起源 | 第16-17页 |
| ·基因组印迹的分子机制 | 第17-19页 |
| ·DNA甲基化 | 第19-30页 |
| ·DNA甲基化模式 | 第19-21页 |
| ·DNA甲基化的机制 | 第21-24页 |
| ·DNA从头甲基化的机制 | 第21-23页 |
| ·DNA维持甲基化的机制 | 第23-24页 |
| ·DNA甲基化与基因表达 | 第24-26页 |
| ·基因内部甲基化与基因表达 | 第24-25页 |
| ·基因启动子甲基化与基因表达 | 第25-26页 |
| ·甲基化CpG结合蛋白 | 第26-29页 |
| ·MBD蛋白家族 | 第26-28页 |
| ·Kaiso蛋白家族 | 第28-29页 |
| ·DNA甲基化的分析方法 | 第29-30页 |
| ·脊椎动物基因组加倍与二倍化 | 第30-34页 |
| ·基因加倍与基因组加倍 | 第30-31页 |
| ·二倍化 | 第31-33页 |
| ·鱼类中同时存在二倍体和多倍体 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 2 两性生殖二倍体金鱼中存在配子特异性甲基化 | 第36-50页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·材料和方法 | 第37-47页 |
| ·溶液配制 | 第37-38页 |
| ·金鱼和彭泽鲫配子的获取 | 第38-39页 |
| ·基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| ·基因组步移法获得金鱼ntl上游启动子序列 | 第40-43页 |
| ·基因组DNA酶切消化 | 第40页 |
| ·酶切后DNA纯化 | 第40-41页 |
| ·连接BD GenomeWalkerTM接头 | 第41页 |
| ·金鱼ntl基因GenomeWalker PCR特异性引物设计 | 第41-42页 |
| ·GenomeWalker~(TM) PCR | 第42-43页 |
| ·目的片段克隆与测序 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第43-44页 |
| ·目的片段的连接和测序 | 第44页 |
| ·金鱼ntl启动子甲基化分析 | 第44-47页 |
| ·CpG岛预测和BSP引物设计 | 第44-45页 |
| ·DNA样本亚硫酸氢盐修饰 | 第45-46页 |
| ·硫化测序PCR(BSP)和单克隆测序 | 第46-47页 |
| ·实验结果 | 第47-49页 |
| ·金鱼和彭泽鲫ntl启动子两轮walker的结果 | 第47-48页 |
| ·金鱼和彭泽鲫配子ntl启动子CpG岛甲基化分析结果 | 第48-49页 |
| ·小结与讨论 | 第49-50页 |
| 3 金鱼ntl启动子CpG岛配子特异性甲基化的生物学功能 | 第50-60页 |
| ·前言 | 第50-51页 |
| ·材料和方法 | 第51-54页 |
| ·溶液配制 | 第51页 |
| ·雌核发育单倍体金鱼胚胎的获得 | 第51-52页 |
| ·金鱼各时期胚胎取材及BSP分析 | 第52页 |
| ·金鱼ntl编码区SNP位点的鉴定和分析 | 第52-54页 |
| ·实验结果 | 第54-57页 |
| ·金鱼ntl基因在早期发育阶段存在表观遗传不对称性 | 第54-56页 |
| ·金鱼成体组织甲基化分析结果 | 第56页 |
| ·金鱼早期胚胎中ntl父母源等位基因表达存在不对称性 | 第56-57页 |
| ·小结与讨论 | 第57-60页 |
| 4 配子特异性甲基化在两性生殖二倍体鱼类中具有进化保守性 | 第60-72页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·材料和方法 | 第60-68页 |
| ·溶液配制 | 第60-62页 |
| ·斑马鱼的催产和胚胎取材 | 第62页 |
| ·斑马鱼ntl启动子甲基化分析 | 第62-63页 |
| ·斑马鱼ntl原位杂交反义RNA探针的合成 | 第63-66页 |
| ·重组载体的构建 | 第63-65页 |
| ·质粒提取与线性化 | 第65页 |
| ·体外转录并纯化capped mRNA | 第65-66页 |
| ·整胚原位杂交 | 第66-68页 |
| ·斑马鱼ntl编码区SNP位点的鉴定和分析 | 第68页 |
| ·实验结果 | 第68-71页 |
| ·斑马鱼配子和早期胚胎ntl启动子甲基化分析 | 第68-69页 |
| ·斑马鱼正常二倍体和雌核发育单倍体胚胎ntl原位杂交分析 | 第69-70页 |
| ·利用SNP分析二倍体斑马鱼早期胚胎父母本转录差异 | 第70-71页 |
| ·小结和讨论 | 第71-72页 |
| 5 金鱼和彭泽鲫ntl近端启动子存在TG串联重复序列差异 | 第72-76页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料和方法 | 第72-73页 |
| ·实验结果 | 第73-75页 |
| ·小结和讨论 | 第75-76页 |
| 6 用TALEN靶向突变斑马鱼ntl启动子TG串联重复序列 | 第76-88页 |
| ·前言 | 第76-77页 |
| ·材料和方法 | 第77-81页 |
| ·TALEN识别靶点模块的构建 | 第77-78页 |
| ·将TALEN靶点识别模块构入pCS2-Fok Ⅰ载体 | 第78-79页 |
| ·TALEN质粒对体外活性检测 | 第79-81页 |
| ·体外转录TALEN质粒对并显微注射 | 第81页 |
| ·实验结果 | 第81-85页 |
| ·TALEN体外活性检测结果 | 第81-82页 |
| ·TALEN显微注射斑马鱼胚胎表型统计 | 第82页 |
| ·突变体筛选和统计分析 | 第82-85页 |
| ·小结和讨论 | 第85-88页 |
| 7 总结与讨论 | 第88-92页 |
| ·本研究主要结果总结 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·进一步研究设想 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-118页 |
| 附录：DNA甲基化分析方法汇总 | 第118-129页 |
| 作者简历 | 第129页 |
