| 目录 | 第1-7页 |
| CONTENTS | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| ·牛病毒性腹泻概述 | 第13-18页 |
| ·病原体 | 第13-17页 |
| ·病原生物型 | 第17-18页 |
| ·牛病毒性腹泻病的类型与临床诊断 | 第18-20页 |
| ·急性感染 | 第18页 |
| ·先天性感染 | 第18-19页 |
| ·持续型感染 | 第19页 |
| ·黏膜病 | 第19-20页 |
| ·诊断方法研究进展 | 第20-24页 |
| ·病原分离 | 第20页 |
| ·免疫酶联吸附试验 | 第20-21页 |
| ·免疫组织化学 | 第21-22页 |
| ·核酸杂交实验技术 | 第22页 |
| ·反转录-多聚链式反应（RT-PCR） | 第22页 |
| ·病毒中和实验 | 第22-23页 |
| ·免疫过氧化酶技术（IP） | 第23页 |
| ·免疫荧光技术 | 第23-24页 |
| ·流行病学 | 第24-25页 |
| ·牛病毒性腹泻病的防治及根除措施 | 第25页 |
| ·BVDV 单克隆抗体在诊断上的应用 | 第25-27页 |
| ·免疫过氧化酶技术在国内外的应用 | 第27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-40页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·病毒株 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·实验动物和细胞 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·主要溶液的配置 | 第30-31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-40页 |
| ·重组 E2 蛋白的表达、纯化及复性 | 第32-33页 |
| ·动物的免疫 | 第33页 |
| ·病毒培养及 TCID50 的测定 | 第33页 |
| ·BVDV BA 株的纯化 | 第33-34页 |
| ·间接 ELISA 的建立 | 第34页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| ·单克隆抗体及杂交瘤细胞的特性鉴定 | 第35-37页 |
| ·免疫过氧化酶（IPMA）的建立及初步应用 | 第37-40页 |
| 3.结果 | 第40-53页 |
| ·重组 E2 蛋白的纯化及复性 | 第40页 |
| ·重组 E2 蛋白的纯化及复性的 SDS-PAGE 分析 | 第40页 |
| ·纯化及复性后的重组蛋白浓度的测定 | 第40页 |
| ·病毒培养 | 第40-42页 |
| ·病毒培养结果 | 第40-41页 |
| ·病毒 TCID50 的测定结果 | 第41-42页 |
| ·细胞融合与筛选 | 第42-44页 |
| ·间接 ELISA 法测定 3 免后小鼠血清抗体效价 | 第42页 |
| ·最佳抗原及抗体工作浓度的确定 | 第42-43页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的鉴定 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第44-48页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清液效价的测定 | 第44页 |
| ·腹水单抗效价测定 | 第44页 |
| ·抗体亚类鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·单克隆抗体病毒中和效价检测 | 第45页 |
| ·间接 ELISA 鉴定 | 第45页 |
| ·免疫荧光鉴定（IFA） | 第45页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第45-47页 |
| ·IPMA 的鉴定 | 第47页 |
| ·单抗的纯化 | 第47-48页 |
| ·IPMA 反应条件的确立 | 第48-53页 |
| ·病毒接种细胞后检测时间的确定 | 第48页 |
| ·单抗 4E3 与 HRP-SPA 最佳工作浓度的确定 | 第48页 |
| ·单抗 4E3 最佳工作时间的确定 | 第48-49页 |
| ·HRP—SPA 的最佳工作时间的确定 | 第49页 |
| ·IPMA 特异性试验 | 第49页 |
| ·IPMA 敏感性试验 | 第49页 |
| ·IPMA 重复性试验 | 第49页 |
| ·RT –PCR 敏感性性试验 | 第49页 |
| ·IPMA 的初步应用 | 第49-53页 |
| 4.讨论 | 第53-54页 |
| 5.结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
