| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| ·苜蓿的特征特性 | 第12页 |
| ·夏季高温对紫花苜蓿的影响 | 第12-14页 |
| ·高温对紫花苜蓿生长发育的影响 | 第12-13页 |
| ·高温对紫花苜蓿越夏性能的影响 | 第13页 |
| ·高温对苜蓿病虫危害的影响 | 第13页 |
| ·高温对苜蓿草产量和质量的影响 | 第13-14页 |
| ·紫花苜蓿适应高温胁迫的机理 | 第14-16页 |
| ·渗透调节作用 | 第14页 |
| ·过氧化作用 | 第14页 |
| ·高温诱导蛋白 | 第14-15页 |
| ·光合作用 | 第15页 |
| ·呼吸作用 | 第15-16页 |
| ·紫花苜蓿的抗热性评价 | 第16页 |
| ·紫花苜蓿秋眠性及抗热性的关系 | 第16-17页 |
| ·紫花苜蓿秋眠性的发现 | 第16-17页 |
| ·紫花苜蓿秋眠性与温度的关系 | 第17页 |
| ·紫花苜蓿的分子生物学研究进展 | 第17-18页 |
| ·国外在紫花苜蓿分子生物学的研究进展 | 第17-18页 |
| ·国内在紫花苜蓿分子生物学的研究进展 | 第18页 |
| ·苜蓿部分克隆出基因全长的高温胁迫诱导基因 | 第18页 |
| ·分离差异表达基因的方法 | 第18-26页 |
| ·mRNA 差异显示技术 | 第18-19页 |
| ·cDNA 代表性差异分析 | 第19页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第19-26页 |
| ·抑制性PCR 原理 | 第19-20页 |
| ·SSH 技术原理图 | 第20-21页 |
| ·SSH 具体操作流程 | 第21-24页 |
| ·SSH 技术的特点 | 第24页 |
| ·SSH 技术在植物基因克隆上的研究进展 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·试剂和酶 | 第26页 |
| ·主要化学试剂 | 第26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·菌株及载体 | 第27页 |
| ·常用溶液配制 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·材料的获取 | 第28页 |
| ·总RNA 提取 | 第28-29页 |
| ·mRNA 分离纯化 | 第29页 |
| ·抑制消减杂交过程（SSH） | 第29-36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第30页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第30-31页 |
| ·限制性内切酶Rsa I 酶切 | 第31-32页 |
| ·苜蓿dscDNA（Tester dscDNA）两端接头的连接 | 第32-33页 |
| ·分析接头连接效率 | 第33页 |
| ·第一次杂交（First Hybridization） | 第33-34页 |
| ·第二次杂交（Second Hybridization） | 第34页 |
| ·第一次PCR 扩增（primer PCR） | 第34-35页 |
| ·第二次PCR 扩增（Nested PCR） | 第35-36页 |
| ·消减效率检测 | 第36页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·消减文库生成 | 第37-39页 |
| ·载体连接 | 第37页 |
| ·连接产物转化 | 第37页 |
| ·转化重组子的鉴定 | 第37-38页 |
| ·文库保存 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-45页 |
| ·总RNA 提取 | 第39页 |
| ·mRNA 的分离纯化 | 第39-40页 |
| ·cDNA 合成以及cDNA 酶切效果分析 | 第40-41页 |
| ·接头连接效率检测 | 第41-42页 |
| ·消减杂交效率的检测 | 第42页 |
| ·消减PCR 结果 | 第42-43页 |
| ·消减文库中插入片段的PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| ·cDNA 文库的滴度和重组率测定 | 第44-45页 |
| 4 阳性差异表达EST 序列生物信息学分析 | 第45-52页 |
| ·测序 | 第45页 |
| ·载体和接头序列的识别与去除 | 第45页 |
| ·DNA 同源性比对 | 第45页 |
| ·EST 序列的分类 | 第45-46页 |
| ·差异表达克隆中已知基因在抗热性中的相关功能分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·测序、序列同源性检测及EST 分类 | 第46页 |
| ·差异表达克隆中已知基因序列的分析 | 第46页 |
| ·差异表达克隆中已知EST 分析 | 第46页 |
| ·差异表达克隆中全新的EST 分析 | 第46-47页 |
| ·差异表达基因功能分类 | 第47页 |
| ·本试验分离得到的部分片段与已分离的植物抗热相关基因的比较 | 第47-52页 |
| 5 讨论与结论 | 第52-54页 |
| ·植物材料取样 | 第52页 |
| ·总RNA 的提取 | 第52页 |
| ·SSH 各个环节进行实时监控 | 第52页 |
| ·在克隆转化时，使用DH-5α电转化感受态细胞 | 第52-54页 |
| 6 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| Abstract | 第62-63页 |
