| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| ·种子的脱水耐性 | 第12页 |
| ·种子脱水耐性保护机制 | 第12-14页 |
| ·过度脱水对种子的伤害 | 第12页 |
| ·种子脱水过程中的保护性物质 | 第12-14页 |
| ·LEA蛋白 | 第13页 |
| ·可溶性非还原糖 | 第13页 |
| ·抗氧化系统 | 第13-14页 |
| ·棉子糖系列寡糖在种子脱水耐性形成中的作用 | 第14页 |
| ·棉子糖系列寡糖 | 第14页 |
| ·棉子糖系列寡糖与种子脱水耐性 | 第14页 |
| ·肌醇半乳糖苷合成酶的调控研究与植物HSE/HSF系统 | 第14-16页 |
| ·肌醇半乳糖苷合成酶的调控研究进展 | 第14-15页 |
| ·植物的HSE/HSF系统及其调控研究 | 第15-16页 |
| ·植物HSF的结构 | 第15-16页 |
| ·A类热激转录因子的相关调控研究 | 第16页 |
| ·植物转基因技术的研究进展 | 第16-18页 |
| ·植物转基因技术的出现与概况 | 第16-17页 |
| ·主要的植物遗传转化方法 | 第17页 |
| ·油菜遗传转化体系的研究现状 | 第17-18页 |
| ·立题依据与技术路线 | 第18-20页 |
| 2 半定量RT-PCR研究油菜种子发育过程中BnHSFA4a的表达变化 | 第20-27页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·酶、试剂盒、分子量标准及其他试剂 | 第20页 |
| ·溶液配制 | 第20页 |
| ·仪器设备 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-23页 |
| ·不同发育期油菜种子总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·反转录获得不同发育期油菜种子cDNA | 第22页 |
| ·设计特异性引物 | 第22页 |
| ·循环条件的优化 | 第22-23页 |
| ·不同发育时期种子的BnHSFA4a基因的表达分析 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·不同发育期油菜种子总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·循环条件的优化 | 第24页 |
| ·不同发育时期种子的BnHSFA4a基因的表达分析 | 第24-26页 |
| ·小结 | 第26-27页 |
| 3 油菜热激转录因子BnHSFA4a的亚细胞定位 | 第27-37页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·核酸 | 第27页 |
| ·菌株与载体 | 第27页 |
| ·缓冲液、培养基和抗生素 | 第27页 |
| ·工具酶及分子量标准 | 第27-28页 |
| ·其他材料试剂 | 第28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·大肠杆菌TOP10菌株感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·带有酶切位点的BnHSFA4a和EGFP的克隆载体的制备 | 第29-30页 |
| ·pBI-BnHSFA4a-EGFP融合表达载体构建 | 第30-31页 |
| ·对照载体的构建 | 第31-32页 |
| ·基因枪转化洋葱表皮细胞 | 第32-33页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察BnHSFA4a亚细胞定位 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·融合表达载体和对照表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察BnHSFA4a亚细胞定位 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 4 BnHSFA4a两种不同启动子的正反义表达载体的构建 | 第37-43页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·核酸 | 第37页 |
| ·质粒与菌株 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·工具酶及分子量标准、其他试剂及仪器设备 | 第37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·BnHSFA4a两种过表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·BnHSFA4a两种反义表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第39-40页 |
| ·四种载体侵染用菌液的制备 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-42页 |
| ·BnHSFA4a两种不同启动子的正反义表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 5 甘蓝型油菜遗传转化体系的初步建立 | 第43-53页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·培养基与菌株 | 第43页 |
| ·激素、抗生素及其他试剂 | 第43页 |
| ·仪器设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·组培用实生苗的获得 | 第43页 |
| ·预培养培养时间及光照条件的探索 | 第43-44页 |
| ·预培养激素适宜浓度探索 | 第44页 |
| ·农杆菌侵染时间的确定 | 第44页 |
| ·共培养和分化培养激素适宜浓度探索 | 第44-45页 |
| ·分化培养基和筛选培养基抗生素适宜浓度筛选 | 第45页 |
| ·生根培养基激素适宜浓度筛选 | 第45页 |
| ·炼苗 | 第45页 |
| ·转基因植株的检测 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·预培养培养时间及光照条件的探索 | 第46页 |
| ·预培养激素适宜浓度探索 | 第46页 |
| ·农杆菌侵染时间的确定 | 第46页 |
| ·共培养和分化培养激素适宜浓度探索 | 第46-49页 |
| ·分化培养基和筛选培养基抗生素适宜浓度探索 | 第49页 |
| ·生根培养基激素适宜浓度探索 | 第49页 |
| ·转基因植株的检测 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 6. 讨论 | 第53-57页 |
| ·半定量RT-PCR研究油菜种子发育过程中BnHSFA4a的表达变化 | 第53-54页 |
| ·油菜热激转录因子BnHSFA4a的亚细胞定位 | 第54页 |
| ·BnHSFA4a两种不同启动子的正反义表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·甘蓝型油菜遗传转化体系的探索 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 个人简介 | 第63-65页 |
| 导师简介 | 第65-67页 |
| 获得成果目录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
