| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·绿僵菌生物学特性 | 第14-15页 |
| ·绿僵菌杀虫机理 | 第15-16页 |
| ·绿僵菌对寄主的附着 | 第15页 |
| ·绿僵菌对寄主的入侵 | 第15-16页 |
| ·机械作用 | 第15页 |
| ·绿僵菌入侵过程中的酶 | 第15-16页 |
| ·绿僵菌对寄主的致病 | 第16页 |
| ·磷酸酶概述 | 第16-20页 |
| ·磷酸酶的分类 | 第16-18页 |
| ·非特异性磷酸酶 | 第17页 |
| ·蛋白磷酸酶 | 第17-18页 |
| ·磷酸酶在病原菌侵入寄主中的作用 | 第18-20页 |
| ·酪氨酸蛋白磷酸酶：YopH | 第19页 |
| ·另一种酪氨酸蛋白磷酸酶：SptP | 第19页 |
| ·肌醇磷酸酶 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| ·P.Pastoris表达系统的优点 | 第20-21页 |
| ·影响P.Pastoris中外源蛋白表达的因素 | 第21-23页 |
| ·外源基因的特性 | 第21页 |
| ·外界表达条件 | 第21-23页 |
| 第2章 绪论 | 第23-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第23页 |
| ·主要研究内容和技术路线 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容 | 第23-24页 |
| ·研究技术路线 | 第24页 |
| ·本文的创新点 | 第24-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·实验菌株 | 第25页 |
| ·基本培养基 | 第25页 |
| ·主要溶液及配制 | 第25-28页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·磷源对绿僵菌生物量和磷酸酶的影响 | 第30-31页 |
| ·绿僵菌孢子的培养及不同磷源的诱导培养 | 第30页 |
| ·绿僵菌的培养及生物量的测定方法 | 第30页 |
| ·粗酶液的制备以及总蛋白的测定 | 第30页 |
| ·酸性磷酸酶活性的测定 | 第30页 |
| ·酪氨酸、丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶活性分析测定 | 第30-31页 |
| ·筛选具有遗传霉素抗性的重组酵母 | 第31-32页 |
| ·筛选遗传霉素抗性重组酵母 | 第31页 |
| ·用PCR分析遗传霉素抗性转化子的整合 | 第31-32页 |
| ·诱导毕赤酵母中的目的基因表达成酪氨酸蛋白磷酸酶 | 第32-33页 |
| ·筛选有可能高效表达目的蛋白的转化子 | 第32页 |
| ·将筛选出的转化子进行大规模诱导培养 | 第32-33页 |
| ·超滤离心和Ni柱亲和层析 | 第33页 |
| ·超滤离心 | 第33页 |
| ·Ni柱亲和层析 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE,IEF-PAGE和Western Blot | 第33-35页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33-34页 |
| ·等电聚焦凝胶电泳(IEF-PAGE) | 第34-35页 |
| ·Western-blot | 第35页 |
| ·酪氨酸蛋白磷酸酶学特性分析 | 第35-36页 |
| ·pH和温度对酪氨酸蛋白磷酸酶活性的影响 | 第35页 |
| ·抑制剂和金属离子对PTPase活性的影响 | 第35-36页 |
| ·数据处理 | 第36-37页 |
| 第4章 结果与分析 | 第37-49页 |
| ·磷源对绿僵菌生物量和产胞外磷酸酶的影响 | 第37-39页 |
| ·磷源对绿僵菌生物量的影响 | 第37页 |
| ·磷源对绿僵菌分泌酸性磷酸酶的影响 | 第37-38页 |
| ·不同磷源对绿僵菌产蛋白磷酸酶活性和比活的影响 | 第38-39页 |
| ·小结与讨论 | 第39页 |
| ·筛选具有遗传霉素抗性的重组酵母 | 第39-40页 |
| ·PCR检测遗传霉素抗性转化子的整合 | 第39-40页 |
| ·小结与讨论 | 第40页 |
| ·粗酶液中PTPase酶活与培养条件的关系 | 第40-42页 |
| ·诱导绿僵菌分泌PTPase的酶活与培养时间的关系 | 第40-41页 |
| ·甲醇诱导毕赤酵母表达PTPase的酶活与培养时间的关系 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母表达PTPase的酶活与甲醇浓度的关系 | 第42页 |
| ·小结与讨论 | 第42页 |
| ·蛋白酶的SDS-PAGE、IEF-PAGE和Western blot分析 | 第42-44页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| ·IEF-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·Western blot分析 | 第44页 |
| ·小结与讨论 | 第44页 |
| ·PTPase酶学特性分析 | 第44-49页 |
| ·pH与PTPase酶活的关系 | 第44-45页 |
| ·温度与PTPase酶活的关系 | 第45-46页 |
| ·抑制剂和金属离子与PTPase酶活的关系 | 第46-47页 |
| ·PTPase的底物特异性 | 第47-48页 |
| ·小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第5章 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 在校期间发表的论文 | 第61页 |
| 参加课题 | 第61页 |
