| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-29页 |
| 参考文献 | 第26-29页 |
| 第一章 CPP-g-CS载体的合成、结构表征及细胞毒性评价 | 第29-50页 |
| 第一节 不同CPP-g-CS载体的合成及结构表征 | 第29-42页 |
| 一、仪器、材料与试剂 | 第29-30页 |
| 二、实验部分 | 第30-32页 |
| ·载体的合成 | 第30-31页 |
| ·产物结构表征 | 第31-32页 |
| 三、实验结果 | 第32-42页 |
| ·合成路线 | 第32-33页 |
| ·合成产物的FTIR图谱 | 第33-37页 |
| ·合成产物的核磁图谱 | 第37-42页 |
| 第二节 不同CPP-g-CS载体的细胞毒性评价 | 第42-48页 |
| 一、仪器与试剂 | 第42页 |
| 二、实验部分 | 第42-43页 |
| ·细胞培养 | 第42页 |
| ·MTT溶液的配制 | 第42页 |
| ·工作溶液的配制 | 第42页 |
| ·载体的体外细胞毒性评价 | 第42-43页 |
| 三、实验结果 | 第43-47页 |
| ·CPP-g-CS载体的体外细胞毒性评价 | 第43-46页 |
| ·不同取代度的载体体外细胞毒性检测 | 第46-47页 |
| 四、讨论 | 第47-48页 |
| 本章小结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 第二章 载siRNA纳米粒的制备及表征 | 第50-63页 |
| 第一节 纳米粒制备工艺的优化 | 第50-56页 |
| 一、仪器与试剂 | 第50-51页 |
| 二、实验部分 | 第51-53页 |
| ·工作溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·单因素考察优化制备工艺 | 第52-53页 |
| 三、实验结果 | 第53-56页 |
| ·预热温度的影响 | 第53-54页 |
| ·脱水剂浓度的影响 | 第54页 |
| ·涡旋时间的影响 | 第54-56页 |
| 第二节 纳米粒理化性质的研究 | 第56-61页 |
| 一、仪器、材料与试剂 | 第56页 |
| 二、实验部分 | 第56-57页 |
| ·纳米粒的制备 | 第56页 |
| ·凝胶阻滞分析载体对siRNA的包载情况 | 第56页 |
| ·纳米粒粒径及外观研究 | 第56-57页 |
| ·纳米粒的稳定性 | 第57页 |
| 三、实验结果 | 第57-61页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第57页 |
| ·纳米粒粒径测定 | 第57-60页 |
| ·纳米粒的形态研究 | 第60页 |
| ·纳米粒的稳定性研究 | 第60-61页 |
| 四、讨论 | 第61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 第三章 载siRNA纳米粒沉默靶基因能力的研究 | 第63-77页 |
| 一、实验材料 | 第63-64页 |
| 二、实验部分 | 第64-67页 |
| ·质粒的制备 | 第64-65页 |
| ·质粒基因的扩增 | 第64页 |
| ·质粒基因的提取 | 第64-65页 |
| ·质粒浓度及纯度的测定 | 第65页 |
| ·载siRNA纳米粒抑制外源基因Luciferase表达的研究 | 第65-66页 |
| ·不同siRNA剂量纳米粒抑制外源基因表达的研究 | 第65页 |
| ·不同取代度载体抑制外源基因表达的研究 | 第65-66页 |
| ·转染时间和载体对纳米粒抑制外源基因表达影响的研究 | 第66页 |
| ·、载siRNA纳米粒抑制内源性基因表达的研究 | 第66-67页 |
| ·不同取代度纳米粒抑制内源性Luciferase表达的研究 | 第66页 |
| ·不同siRNA剂量纳米粒抑制内源性Luciferase表达的研究 | 第66页 |
| ·不同载体及转染时间对Luciferase表达的研究 | 第66-67页 |
| ·Luciferase活力的测定 | 第67页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第67页 |
| ·Luciferase底物溶液的配制 | 第67页 |
| ·Luciferase活力的测定 | 第67页 |
| 三、实验结果 | 第67-74页 |
| ·质粒的扩增、提取、鉴定 | 第67-70页 |
| ·培养板菌落培养 | 第67-69页 |
| ·质粒浓度及纯度的测定 | 第69-70页 |
| ·载siRNA纳米粒抑制外源性Luciferase基因表达的研究 | 第70-72页 |
| ·siRNA剂量及转染时间影响外源性Luciferase表达的研究 | 第70页 |
| ·不同取代度纳米粒影响外源性Luciferase表达的研究 | 第70-71页 |
| ·转染时间和不同载体影响外源性Luciferase表达的研究 | 第71-72页 |
| ·纳米粒抑制内源性Luciferase表达的研究 | 第72-74页 |
| ·不同取代度纳米粒影响内源性Luciferase表达的研究 | 第72-73页 |
| ·siRNA转染剂量影响内源性Luciferase表达的研究 | 第73页 |
| ·转染时间和不同载体纳米粒影响内源性Luciferase表达的研究 | 第73-74页 |
| 四、讨论 | 第74-75页 |
| 本章小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-77页 |
| 第四章 载siRNA纳米粒体外细胞摄取机制研究 | 第77-98页 |
| 一、仪器与试剂 | 第79页 |
| 二、实验部分 | 第79-80页 |
| ·细胞摄取效率的影响因素研究 | 第79页 |
| ·流式细胞仪检测纳米粒摄取情况 | 第79页 |
| ·激光共聚焦观察纳米粒入胞情况 | 第79-80页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA纳米粒入胞机制的研究 | 第80页 |
| 三、实验结果 | 第80-95页 |
| ·细胞摄取研究 | 第80-87页 |
| ·激光共聚焦观察细胞入胞情况 | 第87-92页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA纳米粒摄取机制研究结果 | 第92-95页 |
| 四、讨论 | 第95-96页 |
| 本章小结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-98页 |
| 第五章 载功能siRNA纳米粒的体外肿瘤细胞杀伤研究 | 第98-114页 |
| 第一节 靶向Survivin纳米粒的体外肿瘤细胞杀伤效果 | 第98-105页 |
| 一、仪器及试剂 | 第98-99页 |
| 二、实验部分 | 第99-100页 |
| ·载siRN~(Sur)纳米粒对肿瘤细胞杀伤能力的研究 | 第99页 |
| ·载siRNA~(Sur)纳米粒诱导细胞凋亡的研究 | 第99-100页 |
| ·统计学处理 | 第100页 |
| 三. 实验结果 | 第100-105页 |
| ·划痕实验 | 第100-101页 |
| ·载siRNA~(Sur)纳米粒抑制细胞增殖条件的考察 | 第101页 |
| ·载siRNA~(sur)纳米粒抑制4T1细胞增殖的研究 | 第101-102页 |
| ·凋亡细胞形态学观察 | 第102-103页 |
| ·载siRNA~(Sur)纳米粒诱导细胞凋亡的研究 | 第103-105页 |
| 第二节 靶向Bcl-2的纳米粒体外肿瘤细胞杀伤效果 | 第105-111页 |
| 一、仪器及试剂 | 第105页 |
| 二、实验部分 | 第105-106页 |
| ·载siRNA~(Bcl-2)纳米粒对肿瘤细胞杀伤能力的研究 | 第105页 |
| ·载siRNA~(Bcl-2)纳米粒诱导细胞凋亡的研究 | 第105-106页 |
| ·统计学处理 | 第106页 |
| 三、实验结果 | 第106-110页 |
| ·划痕实验 | 第106-107页 |
| ·显微镜观察载siRNA~(Bcl-2)纳米粒抑制细胞增殖 | 第107-108页 |
| ·载siRNAB~(Bcl-2)纳米粒抑制细胞增殖条件的考察 | 第108页 |
| ·载siRNA~(Bcl-2)纳米粒抑制4T1细胞增殖的研究 | 第108-109页 |
| ·流式检测载siRNA_(Bcl-2)纳米粒诱导细胞凋亡 | 第109-110页 |
| 四、讨论 | 第110-111页 |
| 本章小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第六章 载治疗siRNA纳米粒的动物体内抗肿瘤研究 | 第114-137页 |
| 第一节 TAT-g-CS/siRNA纳米粒体内抗肿瘤评价 | 第114-128页 |
| 一、仪器、材料、试剂及实验动物 | 第114-115页 |
| 二、实验方法 | 第115-117页 |
| ·Bouin’s固定液的配制 | 第115页 |
| ·中性甲醛的配制 | 第115页 |
| ·载治疗siRNA纳米粒对乳腺癌治疗的研究 | 第115-116页 |
| ·动物活体成像仪观察TAT-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒抑制肿瘤转移的效果 | 第116页 |
| ·TAT-g-CS/siKNA~(Sur)纳米粒对荷瘤小鼠生存率影响的研究 | 第116-117页 |
| 三、实验结果 | 第117-128页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒对肿瘤体积的影响 | 第117-118页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA~(Bcl-2)纳米粒对肿瘤体积的影响 | 第118-119页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA纳米粒对瘤重的影响 | 第119-120页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒抑制肿瘤转移的研究 | 第120-123页 |
| ·活体成像观察TAT-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒抗肿瘤效果 | 第123-127页 |
| ·TAT-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒对荷瘤小鼠生存率的影响 | 第127-128页 |
| 第二节 6R-g-CS/siRNA纳米粒体内抗肿瘤评价 | 第128-135页 |
| 一、仪器及试剂 | 第128页 |
| 二、实验方法 | 第128-129页 |
| 载治疗siRNA纳米粒对乳腺癌治疗的考察 | 第128-129页 |
| 三、实验结果 | 第129-134页 |
| ·6R-g-CS/siRNA纳米粒抑制乳腺癌肿瘤生长的研究 | 第129-130页 |
| ·6R-g-CS/siRNA纳米粒对瘤重的影响 | 第130-132页 |
| ·6R-g-CS/siRNA肺组织固定后照片 | 第132-133页 |
| ·6R-g-CS/siRNA~(Sur)纳米粒治疗后病理的变化 | 第133-134页 |
| 四、讨论 | 第134-135页 |
| 本章小结 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-137页 |
| 全文总结及展望 | 第137-140页 |
| 综述 | 第140-155页 |
| 参考文献 | 第149-155页 |
| 作者简介 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
