| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| ·木聚糖酶概述 | 第10-12页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第10-12页 |
| ·木聚糖酶的分类 | 第12页 |
| ·GH11 木聚糖酶的结构特征 | 第12-13页 |
| ·11 家族木聚糖酶的基本结构特征 | 第12-13页 |
| ·11 家族木聚糖酶 N 端二硫键 | 第13页 |
| ·11 家族木聚糖酶拇指结构 | 第13页 |
| ·酶分子改造 | 第13-15页 |
| ·定点突变 | 第14页 |
| ·杂合酶技术 | 第14页 |
| ·计算机辅助设计 | 第14-15页 |
| ·分子动力学模拟 | 第15页 |
| ·国内外研究进展 | 第15-16页 |
| ·利用生物信息学工具研究酶蛋白的进展 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶研究进展 | 第16页 |
| ·本课题研究的内容和意义 | 第16-18页 |
| ·研究的基础 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17页 |
| ·研究意义 | 第17-18页 |
| 第二章 木聚糖酶二硫键的生物信息学分析 | 第18-23页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·研究对象 | 第18-19页 |
| ·计算机硬件配置 | 第19页 |
| ·同源建模、计算及分析软件 | 第19页 |
| ·常用数据库 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-21页 |
| ·木聚糖酶一级结构的同源比对 | 第20页 |
| ·同源建模 | 第20页 |
| ·EvXyn11M的分子动力学模拟 | 第20-21页 |
| ·结果与讨论 | 第21-23页 |
| ·木聚糖酶一级结构的分析 | 第21页 |
| ·木聚糖酶 EvXyn11M的分子动力学模拟 | 第21-23页 |
| 第三章 二硫键影响木聚糖酶温度特性的验证 | 第23-36页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·菌种和试剂 | 第23-24页 |
| ·实验软件 | 第24页 |
| ·培养基及主要溶液配制 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·合成基因 Evxyn11TS二硫键的去除 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化及蓝白斑筛选 | 第27页 |
| ·质粒提取方法(碱法) | 第27-28页 |
| ·pUCm-T-Evxyn11M载体的构建 | 第28页 |
| ·pPIC9K-Evxyn11M的构建 | 第28-29页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第29页 |
| ·pPIC9K- Evxyn11M的转化 | 第29页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选 | 第29-30页 |
| ·毕赤酵母重组子的表达 | 第30页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 鉴定 | 第30页 |
| ·重组酶的纯化 | 第30-31页 |
| ·DNS 法测定木聚糖酶活性 | 第31页 |
| ·酶学性质测定 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·合成基因 Evxyn11TS二硫键的去除 | 第31-32页 |
| ·pUCm-T- Evxyn11M和 pPIC9K-Evxyn11M的构建的 | 第32-33页 |
| ·酵母基因组的 PCR 验证 | 第33页 |
| ·重组木聚糖酶的表达和纯化 | 第33-34页 |
| ·酶学性质分析 | 第34-36页 |
| 第四章 木聚糖酶拇指结构的生物信息学分析 | 第36-43页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·研究对象 | 第37页 |
| ·计算机硬件配置 | 第37页 |
| ·同源建模、计算及分析软件 | 第37页 |
| ·常用数据库 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·木聚糖酶一级结构的同源比对 | 第37页 |
| ·同源建模 | 第37页 |
| ·木聚糖酶空间结构比对 | 第37-38页 |
| ·EvXyn11A 的分子动力学模拟 | 第38页 |
| ·EvXyn11A 蛋白结构中 Glu 与拇指结构个分子的距离测定 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·木聚糖酶一级结构的同源比对 | 第38-39页 |
| ·木聚糖酶空间结构比对及距离测定 | 第39-40页 |
| ·木聚糖酶 EvXyn11A 的分子动力学模拟 | 第40-43页 |
| 第五章 拇指结构影响木聚糖酶 pH 特性的验证 | 第43-52页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·菌种和试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·培养基及主要溶液配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·EvXyn11TS拇指区域基因序列的替换 | 第43-46页 |
| ·pUCm-T- Evxyn11A 的构建 | 第46页 |
| ·pPIC9K - Evxyn11A 的构建 | 第46页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第46页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选和表达 | 第46页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 鉴定 | 第46页 |
| ·重组酶的纯化 | 第46页 |
| ·酶学性质测定 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-52页 |
| ·EvXyn11TS拇指区域基因序列的替换 | 第46-47页 |
| ·pUCm-T- Evxyn11A 和 pPIC9K - Evxyn11A 的构建的 | 第47-48页 |
| ·酵母基因组的 PCR 验证 | 第48页 |
| ·重组木聚糖酶的表达和纯化 | 第48-49页 |
| ·酶学性质分析 | 第49-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第52页 |
| 存在的问题及展望 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
