| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 Δ6-脂肪酸脱氢酶的研究进展 | 第10-11页 |
| 2 棉花转化的研究进展 | 第11-19页 |
| ·棉花基因转化技术 | 第12-18页 |
| ·分生组织转化法 | 第12-13页 |
| ·基因枪转化法 | 第13-14页 |
| ·花粉管通道转化法 | 第14-15页 |
| ·农杆菌转化法 | 第15-18页 |
| ·农杆菌介导转化棉花的研究进展 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二部分 实验部分 | 第21-54页 |
| 第一章 植物表达载体的构建 | 第21-37页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·供试材料 | 第21-22页 |
| ·实验用试剂 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-27页 |
| ·质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的构建 | 第22-23页 |
| ·SDS 碱裂解法中量制备载体 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备及转化方法 | 第24-26页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·载体转化大肠杆菌感受态细胞 | 第25-26页 |
| ·农杆菌电转感受态细胞的制备及转化 | 第26-27页 |
| ·农杆菌电转感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·电击转化农杆菌 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-36页 |
| ·载体 pCAMBIA2301 和 pCAMBIA1301.1 的酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·载体 pCAMBIA2301.1 的构建 | 第28-30页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的构建 | 第30-33页 |
| ·目的片段的连接 | 第30-32页 |
| ·PCR 鉴定重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D | 第32-33页 |
| ·酶切鉴定重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D | 第33页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的测序 | 第33页 |
| ·表达载体 pCAMBIA2301.1-D6D 转化根癌农杆菌结果 | 第33-36页 |
| ·菌落 PCR 鉴定转有重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的根癌农杆菌 | 第33-34页 |
| ·PCR 鉴定转有重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的根癌农杆菌 | 第34-35页 |
| ·酶切鉴定转有重组质粒 pCAMBIA2301.1-D6D 的根癌农杆菌 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 农杆菌介导的新疆棉花下胚轴的遗传转化 | 第37-50页 |
| 引言 | 第37页 |
| 1 实验材料 | 第37-39页 |
| ·植物材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-41页 |
| ·棉花下胚轴的敏感试验 | 第39页 |
| ·农杆菌介导转化条件的筛选 | 第39-41页 |
| ·菌液浓度 | 第39-40页 |
| ·浸染时间 | 第40页 |
| ·共培养温度 | 第40页 |
| ·共培养时间 | 第40页 |
| ·乙酰丁香酮的浓度 | 第40页 |
| ·超声波处理时间 | 第40-41页 |
| ·GUS 染色检测 | 第41页 |
| 3 实验结果与分析 | 第41-47页 |
| ·敏感试验结果 | 第41-42页 |
| ·不同转化条件对棉花下胚轴 GUS 瞬间表达率的影响 | 第42-44页 |
| ·不同转化条件对棉花下胚轴出愈的影响 | 第44-46页 |
| ·抗性愈伤分子检测 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 农杆菌介导的新疆棉花茎尖转化 | 第50-54页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50页 |
| 3 实验结果与分析 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三部分 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 1 英文缩略语 | 第62-63页 |
| 附录 2 重组质粒 2301.1-Δ6目的片段基因测序结果比对 | 第63-65页 |
| 附录 3 新疆棉花经体细胞胚胎发生途径获得完整正常再生苗图 | 第65-66页 |
| 附录 4 基本培养基 MSB 及主要试剂的配制方法 | 第66-68页 |
| 附录 5 转基因棉花叶片基因组 DNA 目的片段扩增测序结果比对 | 第68-70页 |
| 研究生期间发表论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
