| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述及研究目的和意义 | 第11-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 伪狂犬病简介 | 第11-13页 |
| ·PRV理化特性 | 第11-12页 |
| ·PRV的致病机理 | 第12-13页 |
| ·伪狂犬病临床特征 | 第13页 |
| ·伪狂犬病流行现状及新特点 | 第13页 |
| 2 PRV的分子生物学研究进展 | 第13-17页 |
| ·PRV的基因组 | 第13-14页 |
| ·PRV的糖蛋白 | 第14-17页 |
| ·必需糖蛋白 | 第14-16页 |
| ·非必需糖蛋白 | 第16-17页 |
| 3 PRV诊断与防治研究进展 | 第17-21页 |
| ·病原学诊断技术 | 第17-19页 |
| ·病毒分离鉴定与动物接种 | 第17-18页 |
| ·核酸探针检测技术 | 第18页 |
| ·PCR技术 | 第18-19页 |
| ·基因芯片技术 | 第19页 |
| ·血清学诊断技术 | 第19-20页 |
| ·血清中和试验(SN) | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附试验(EL1SA) | 第19-20页 |
| ·伪狂犬病的预防与控制 | 第20-21页 |
| 4. 选题目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验研究 | 第22-54页 |
| 第二章 伪狂犬病病毒gH基因的生物信息学分析 | 第22-29页 |
| 1 材料 | 第22页 |
| ·试验数据 | 第22页 |
| ·常用的生物信息学软件 | 第22页 |
| 2. 方法 | 第22-24页 |
| ·PRV gH基因核苷酸序列分析 | 第22-23页 |
| ·PRV gH基因核酸序列稀有密码子分析 | 第22页 |
| ·PRV gH基因核酸序列CpG岛分析 | 第22-23页 |
| ·PRV gH氨基酸序列分析 | 第23-24页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列同源性分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列信号肽分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列疏水性分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列跨膜区分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列抗原位点预测分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因编码蛋白二级结构预测 | 第23页 |
| ·PRV gH基因编码蛋白理化性质分析 | 第23页 |
| ·PRV gH基因编码蛋白亚细胞定位预测 | 第23-24页 |
| 3. 结果 | 第24-27页 |
| ·PRV gH基因核序列分子特性 | 第24页 |
| ·PRV gH基因核苷酸序列的稀有密码子分析 | 第24页 |
| ·PRV gH基因核苷酸序列CpG岛分析 | 第24页 |
| ·PRV gH氨基酸序列分子特性 | 第24-27页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列同源性和进化树分析 | 第24-25页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列信号肽分析 | 第25页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列跨膜区分析 | 第26页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列抗原位点分析 | 第26-27页 |
| ·PRV gH基因翻译的氨基酸序列二级结构预测 | 第27页 |
| ·PRV gH基因编码蛋白理化性质分析 | 第27页 |
| ·PRV gH基因编码蛋白亚细胞定位的预测 | 第27页 |
| 4. 讨论 | 第27-29页 |
| ·PRV gH基因核酸序列的特征 | 第27-28页 |
| ·PRV gH基因氨基酸序列的特征 | 第28-29页 |
| 第三章 伪狂犬病病毒gH基因和gL基因的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备 | 第29-47页 |
| 1 材料 | 第29-32页 |
| ·细胞、毒株、菌株及载体 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·主要药品及试剂的配制 | 第29-31页 |
| ·克隆及亚克隆主要试剂 | 第30-31页 |
| ·蛋白表达及鉴定主要试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-39页 |
| ·PRV gH、gL基因的扩增 | 第32-33页 |
| ·PRV病毒的增殖培养 | 第32页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·gH、gL基因的PCR扩增 | 第33页 |
| ·gH、gL基因TA克隆的鉴定 | 第33-36页 |
| ·目的片段的回收 | 第33-34页 |
| ·目的片段与pMD19-T Simple克隆载体连接 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·重组菌培养筛选 | 第35-36页 |
| ·gH、gL基因表达质粒的构建 | 第36页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第37页 |
| ·诱导时间的优化 | 第37页 |
| ·诱导温度的优化 | 第37页 |
| ·诱导IPTG浓度的优化 | 第37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·包涵体的纯化 | 第37-38页 |
| ·包涵体的复性 | 第38页 |
| ·可溶性蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·制备兔抗PRV tgH、tgL多克隆抗体及其效价测定 | 第38-39页 |
| ·兔抗tgH、tgL的IgG提取 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·PRV gH、gL基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化及纯化 | 第42-44页 |
| ·多克隆抗体效价的测定 | 第44页 |
| 4. 讨论 | 第44-47页 |
| ·基因扩增和重组表达质粒构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白表达和纯化 | 第46-47页 |
| 第四章 gH、gL基因编码蛋白在宿主细胞的定位及其多克隆抗体对病毒感染影响初步研究 | 第47-54页 |
| 1.材料 | 第47-48页 |
| ·毒株、细胞及抗体 | 第47页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第47-48页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·试剂配制 | 第47-48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-50页 |
| ·间接免疫荧光检测Vero细胞中PRV gH、gL定位方法的建立及条件优化 | 第48-49页 |
| ·间接免疫荧光检测方法的建立 | 第48-49页 |
| ·间接免疫荧光检测方法的条件优化 | 第49页 |
| ·间接免疫荧光结果判定 | 第49页 |
| ·PRV标准生长曲线建立 | 第49-50页 |
| ·细胞培养板蚀斑技术 | 第49-50页 |
| ·PRV一步法生长曲线 | 第50页 |
| ·抗gH、gL蛋白多克隆抗体对PRV感染的影响 | 第50页 |
| ·对PRV感染细胞的影响 | 第50页 |
| ·对已感染细胞引起邻近细胞感染的影响 | 第50页 |
| 3. 结果 | 第50-52页 |
| ·间接免疫荧光检测方法的条件优化 | 第50-51页 |
| ·gH、gL在感染PRV的Vero细胞内定位特征 | 第51-52页 |
| ·抗gH、gL蛋白多克隆抗体对PRV感染的影响 | 第52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| ·在宿主细胞中的定位分析 | 第52-53页 |
| ·抗gH、gL蛋白多克隆抗体对PRV增殖的影响 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
