| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 前言 | 第14-22页 |
| 第一章 报告基因的选择及质粒的抽提 | 第22-26页 |
| 1.试剂和仪器 | 第22页 |
| 2.实验方法 | 第22-24页 |
| ·培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·细菌的复苏、扩增和冻存 | 第23页 |
| ·质粒DNA的大量抽提 | 第23-24页 |
| ·DNA浓度和纯度的测定 | 第24页 |
| 3.试验结果 | 第24-25页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因pEGFP-N2质粒的提取 | 第24页 |
| ·虫荧光素酶报告基因质粒的提取 | 第24-25页 |
| 4.小结 | 第25-26页 |
| 第二章 聚阳离子纳米脂质载体的制备及处方组成的优化 | 第26-78页 |
| 2-1 烷基化聚乙烯亚胺的合成及表征 | 第26-29页 |
| 1.试剂和仪器 | 第26页 |
| 2.试验方法 | 第26-27页 |
| 3.试验结果 | 第27-28页 |
| 4.讨论 | 第28-29页 |
| 2-2 聚阳离子纳米脂质载体制备方法的研究 | 第29-33页 |
| 1.试剂和仪器 | 第29页 |
| 2.试验方法 | 第29-30页 |
| ·聚阳离子纳米脂质载体的处方组成 | 第29页 |
| ·聚阳离子纳米脂质载体的制备方法 | 第29-30页 |
| ·PNLC制备工艺的优化 | 第30页 |
| ·PNLC粒径和Zeta电位的测定 | 第30页 |
| 3.试验结果 | 第30-33页 |
| ·制备方法对PNLC粒径的影响 | 第30-31页 |
| ·乳化溶剂蒸发法制备PNLC制备工艺的优化 | 第31-33页 |
| 4.讨论 | 第33页 |
| 2-3 聚阳离子纳米脂质载体的处方优化 | 第33-75页 |
| 1.试剂和仪器 | 第34页 |
| 2.试验方法 | 第34-37页 |
| ·聚阳离子纳米脂质载体的处方筛选及优化 | 第34-36页 |
| ·PNLC的制备方法 | 第36页 |
| ·PNLC粒径和zeta电位的测定 | 第36页 |
| ·PNLC/pEGFP-N2复合物的制备 | 第36页 |
| ·细胞的培养及体外细胞基因转染试验 | 第36-37页 |
| ·SPC-Al细胞表达的绿色荧光蛋白荧光强度的测定 | 第37页 |
| 3.试验结果 | 第37-69页 |
| ·烷基化聚乙烯亚胺对PNLC的影响 | 第37-53页 |
| ·PNLC中油相对PNLC的影响 | 第53-55页 |
| ·磷脂成分对PNLC影响 | 第55-69页 |
| 4.讨论 | 第69-73页 |
| 5.小结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 第三章 聚阳离子纳米脂质载体作为基因递送载体的研究 | 第78-100页 |
| 1.试剂和仪器 | 第78页 |
| 2.试验方法 | 第78-81页 |
| ·PNLC的处方组成 | 第79页 |
| ·复合物的制备及其理化性质的表征 | 第79-80页 |
| ·细胞的培养 | 第80页 |
| ·细胞的转染 | 第80页 |
| ·流式细胞仪评价绿色荧光蛋白报告基因细胞体外转染效率 | 第80页 |
| ·虫荧光素酶活性的测定 | 第80-81页 |
| ·PNLC细胞毒性的考察结果 | 第81页 |
| 3.实验结果 | 第81-94页 |
| ·PNLC/DNA复合物理化性质的表征 | 第81-83页 |
| ·PNLC转染绿色荧光蛋白报告基因pEGFP-N2的研究 | 第83-91页 |
| ·PNLC转染虫荧光素酶报告基因pGL3-luc的研究 | 第91-93页 |
| ·PNLC载体在SPC-Al细胞中的细胞毒性的研究 | 第93-94页 |
| 4.讨论 | 第94-96页 |
| 5.小结 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 第四章 聚阳离子纳米脂质载体细胞穿膜机理的研究 | 第100-121页 |
| 1.试剂和仪器 | 第100-101页 |
| 2.试验方法 | 第101-102页 |
| ·PTD、PDD、PMD组成的PNLC的制备 | 第101页 |
| ·细胞及细胞培养 | 第101页 |
| ·PNLC/DNA复合物的制备以及理化性质的考察 | 第101页 |
| ·体外细胞基因转染试验 | 第101页 |
| ·FITC标记的P_(12)C_(16)(1:6)的合成以及FITC标记的PNLC载体的制备 | 第101页 |
| ·PNLC/DNA复合物在SPC-Al细胞中内吞的研究 | 第101-102页 |
| ·PNLC基因递送作用机制的研究 | 第102页 |
| ·激光共聚焦显微镜 | 第102页 |
| 3.试验结果 | 第102-111页 |
| ·PNLC的制备以及PNLC/DNA复合物(N/P)理化性质的表征 | 第102-103页 |
| ·PNLC在SPC-Al细胞中内吞途径的研究 | 第103-108页 |
| ·微管和摩托蛋白对于PNLC/DNA复合物在细胞内转运的影响 | 第108-110页 |
| ·PNLC/DNA复合物与晚期内吞泡/溶酶体的共定位研究 | 第110-111页 |
| 4.讨论 | 第111-116页 |
| 5.小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-121页 |
| 第五章 聚阳离子纳米脂质载体转运过程的研究 | 第121-132页 |
| 1.试剂与仪器 | 第121页 |
| 2.试验方法 | 第121-122页 |
| ·PME组成的PNLC的处方组成及制备 | 第121页 |
| ·PNLC/DNA复合物的制备及理化性质的表征 | 第121页 |
| ·PNLC和质粒DNA的荧光标记 | 第121-122页 |
| ·细胞培养以及基因转染 | 第122页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第122页 |
| 3.试验结果 | 第122-130页 |
| ·PNLC/DNA复合物的形态观察 | 第122-123页 |
| ·PNLC/DNA复合物的结合形成复合物的情况 | 第123页 |
| ·PNLC/DNA复合物在细胞表面的情况 | 第123-125页 |
| ·PNLC/DNA复合物在细胞内的运动 | 第125-126页 |
| ·PNLC/DNA复合物与溶酶体的定位 | 第126-128页 |
| ·PNLC/DNA复合物进入细胞核的观察 | 第128-130页 |
| 4.讨论 | 第130页 |
| 5.小结 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-132页 |
| 全文总结 | 第132-135页 |
| 在校期间发表论文 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
