| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| ·我国小麦面粉使用现状 | 第11-12页 |
| ·小麦面粉白度的影响因素 | 第12-13页 |
| ·小麦面粉中的天然色素 | 第12页 |
| ·小麦面粉中的多酚氧化酶 | 第12页 |
| ·种皮颜色、籽粒硬度等影响因素 | 第12-13页 |
| ·小麦天然色素合成途径及其关键调控酶 | 第13-19页 |
| ·类异戊二烯物质的生物合成 | 第13-14页 |
| ·甲羟戊酸激酶的生物学特性 | 第14-16页 |
| ·甲羟戊酸激酶的晶体结构 | 第15-16页 |
| ·甲羟戊酸激酶基因克隆研究进展 | 第16-18页 |
| ·微生物甲羟戊酸激酶基因的分子克隆 | 第16-17页 |
| ·动物甲羟戊酸激酶基因的分子克隆 | 第17页 |
| ·植物甲羟戊酸激酶基因的分子克隆 | 第17-18页 |
| ·甲羟戊酸激酶基因的表达 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·仪器和药品 | 第19-22页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·试剂及药品 | 第20-22页 |
| ·质粒、工具酶和试剂 | 第20页 |
| ·溶液的配制 | 第20-22页 |
| ·方法 | 第22-32页 |
| ·RNA提取 | 第22页 |
| ·RNA的电泳检测 | 第22页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第22-23页 |
| ·基因特异片段扩增 | 第23-26页 |
| ·基因特异片段的引物设计 | 第23页 |
| ·基因特异片段的PCR结果检测 | 第23页 |
| ·扩增片段的回收 | 第23-24页 |
| ·回收产物的电泳检测 | 第24页 |
| ·PCR产物的连接 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·转化、培养 | 第24-25页 |
| ·阳性重组子鉴定 | 第25页 |
| ·阳性质粒的保种和质粒提取 | 第25页 |
| ·质粒提取 | 第25页 |
| ·重组质粒检测和测序 | 第25页 |
| ·缺失验证 | 第25-26页 |
| ·第五号质粒的PCR反应 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的纯化和电泳浓度检测 | 第26页 |
| ·第五号质粒测序 | 第26页 |
| ·通过RACE技术快速获得末端序列 | 第26-28页 |
| ·RACE引物的设计 | 第26页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·RACE快速扩增末端序列 | 第27-28页 |
| ·RACE PCR产物纯化 | 第28页 |
| ·RACE PCR产物的连接转化 | 第28页 |
| ·RACE PCR产物重组子的筛选 | 第28页 |
| ·基因特异片段和RACE序列拼接全长序列 | 第28页 |
| ·Mevalonate kinase全长序列的扩增 | 第28-29页 |
| ·Mevalonate kinase全长引物的设计 | 第28页 |
| ·全长基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·全长PCR产物的测序 | 第29页 |
| ·甲羟戊酸激酶的原核表达 | 第29-31页 |
| ·原核表达引物设计 | 第29页 |
| ·原核表达序列的PCR扩增 | 第29页 |
| ·甲羟戊酸激酶原核表达序列PCR扩增产物的酶切 | 第29-30页 |
| ·酶切产物的连接和转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆重组子的PCR鉴定、酶切鉴定及质粒提取 | 第30页 |
| ·甲羟戊酸激酶蛋白表达条件的优化 | 第30-31页 |
| ·IPTG浓度的优化 | 第30页 |
| ·诱导温度的优化 | 第30-31页 |
| ·甲羟戊酸激酶蛋白的大量表达 | 第31页 |
| ·蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白质 | 第31-32页 |
| ·纯化蛋白的透析 | 第32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-45页 |
| ·小麦RNA的电泳检测 | 第32-33页 |
| ·济南13号基因特异片段PCR产物检测 | 第33-34页 |
| ·RACE快速末端PCR扩增结果和RACE菌液PCR鉴定 | 第34-36页 |
| ·MVK全长基因序列的扩增及基因性质分析 | 第36-40页 |
| ·小麦甲羟戊酸激酶全长基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·小麦甲羟戊酸激酶基因的特性分析 | 第37-40页 |
| ·MVK开放阅读框的扩增和酶切 | 第40-41页 |
| ·中国春、玉麦、济南13表达载体的构建和酶切验证 | 第41-42页 |
| ·甲羟戊酸激酶蛋白表达条件的优化 | 第42-43页 |
| ·甲羟戊酸激酶蛋白表达产物的纯化 | 第43-45页 |
| 第四章 讨论 | 第45-47页 |
| ·分离纯化高质量的植物RNA是克隆目的基因的关键 | 第45页 |
| ·甲羟戊酸激酶基因的克隆和原核表达 | 第45页 |
| ·高白度面粉小麦与低白度面粉小麦MVK重要氨基酸残基的差异 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 已发表的文章 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
