| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-15页 |
| ·茶树抗寒机理研究现状 | 第9-11页 |
| ·生理生化与抗寒性研究 | 第9-11页 |
| ·分子机理与抗寒性研究 | 第11页 |
| ·CBF 转录因子研究现状 | 第11-13页 |
| ·CBF 转录因子的结构特点 | 第11-12页 |
| ·CBF 转录因子的调节表达机制 | 第12页 |
| ·CBF 转录因子在改良植物抗逆性的研究 | 第12-13页 |
| ·植物抗寒性基因工程研究现状 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-17页 |
| ·研究目的和意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·茶树 CsCBF1 调控途径的初步研究 | 第15-16页 |
| ·茶树 CsCBF1 真核表达载体的构建 | 第16页 |
| ·转茶树 CsCBF1 基因烟草的获得 | 第16页 |
| ·转茶树 CsCBF1 烟草的抗寒性分析 | 第16页 |
| ·研究技术路线 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-33页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·仪器与试剂 | 第17-20页 |
| ·主要实验仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·实验中常用试剂配方 | 第17-20页 |
| ·实验所用引物 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-33页 |
| ·茶树总 RNA 的获得及反转录 cDNA | 第20-22页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第22-23页 |
| ·茶树 CsCBF1 目的片段连接与转化 | 第23-25页 |
| ·构建真核表达重组子 pBI121-CsCBF1 | 第25-28页 |
| ·热激法将 pBI121-CsCBF1 转化到农杆菌 | 第28-29页 |
| ·农杆菌转化烟草及转基因苗的获得 | 第29页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第29-31页 |
| ·转基因烟草的抗寒性鉴定 | 第31-32页 |
| ·转基因烟草的抗寒性鉴定 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-41页 |
| ·RNA 提取与质量检测 | 第33页 |
| ·RNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·提取 RNA 的纯度检测 | 第33页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第33-34页 |
| ·真核表达载体 PBI121-CSCBF1的构建 | 第34-36页 |
| ·目的片段的扩增 | 第34-35页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 DH5α阳性菌落 PCR 验证 | 第35页 |
| ·表达载体转化到农杆菌的菌落 PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·阳性克隆菌落质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·农杆菌转化烟草及转基因苗的获得 | 第36-37页 |
| ·转基因烟草的分子生物学检测 | 第37-38页 |
| ·转基因烟草 DNA 的 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·转基因烟草 RNA 的反转录 RT-PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·阳性转基因烟草的 GUS 活性染色 | 第37-38页 |
| ·转基因烟草的抗寒性鉴定 | 第38-41页 |
| ·相对电导率 | 第38页 |
| ·丙二醛(MDA) | 第38页 |
| ·叶绿素荧光参数 Fv／Fm | 第38-40页 |
| ·生长恢复试验 | 第40-41页 |
| 5 讨论 | 第41-44页 |
| ·CTAB 法提取总 RNA | 第41页 |
| ·半定量 PCR | 第41页 |
| ·半定量 PCR 结果分析 | 第41-42页 |
| ·植物表达载体构建 | 第42-43页 |
| ·转基因植物的分子生物学检测 | 第43页 |
| ·转基因烟草的抗寒性鉴定 | 第43-44页 |
| 6 结论 | 第44-45页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第44页 |
| ·植物表达载体 PBI121-CSCBF1的构建 | 第44页 |
| ·转基因烟草的抗寒性鉴定 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 A 中英文缩写与注释 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
| 在读期间发表论文成果清单 | 第52页 |
