| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-39页 |
| ·莱茵衣藻的研究概况 | 第12-18页 |
| ·莱茵衣藻的概述 | 第12-15页 |
| ·莱茵衣藻的分类地位及其细胞结构 | 第12-13页 |
| ·莱茵衣藻的生活史 | 第13-14页 |
| ·莱茵衣藻是一种很好的模式生物 | 第14-15页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化研究进展 | 第15-17页 |
| ·莱茵衣藻的遗传学特性 | 第15-16页 |
| ·遗传转化方法概述 | 第16-17页 |
| ·莱茵衣藻三套基因组转化研究概况 | 第17-18页 |
| ·莱茵衣藻的核基因组转化 | 第17-18页 |
| ·莱茵衣藻的叶绿体转化 | 第18页 |
| ·莱茵衣藻的线粒体转化 | 第18页 |
| ·微藻的油脂合成与积累概况 | 第18-24页 |
| ·植物油脂的生物合成与积累 | 第18-21页 |
| ·三酰甘油的生物合成与积累 | 第19-20页 |
| ·油脂合成中的重要酶类 | 第20-21页 |
| ·微藻油脂的合成与积累 | 第21-22页 |
| ·微藻油脂概述 | 第21页 |
| ·三酰甘油的生物合成与积累 | 第21-22页 |
| ·微藻与高等植物脂代谢的比较 | 第22-23页 |
| ·微藻油脂积累的影响因素 | 第23-24页 |
| ·营养物 | 第23页 |
| ·温度 | 第23页 |
| ·光照强度 | 第23-24页 |
| ·生长期及生理状态 | 第24页 |
| ·基因功能研究方法概况 | 第24-29页 |
| ·基因转导技术 | 第24页 |
| ·反义技术 | 第24-25页 |
| ·基因敲除与敲入 | 第25页 |
| ·RNA干扰技术 | 第25-29页 |
| ·MicroRNA的形成及作用机制 | 第26-28页 |
| ·siRNA与miRNA的比较 | 第28页 |
| ·植物miRNA的生物学功能 | 第28-29页 |
| ·酰基载体蛋白(ACP)的研究现状 | 第29-31页 |
| ·编码ACP的基因家族 | 第30-31页 |
| ·植物ACP基因家族 | 第30页 |
| ·植物ACP基因结构与染色体分布 | 第30-31页 |
| ·有关ACP1基因功能的研究 | 第31页 |
| ·Rubisco活化酶(RCA)的研究现状 | 第31-34页 |
| ·RCA的发现 | 第31-32页 |
| ·RCA的分子特性与功能 | 第32-33页 |
| ·RCA活化Rubisco的作用机制 | 第33-34页 |
| ·生物柴油的研究概况 | 第34-38页 |
| ·生物柴油概况 | 第35-36页 |
| ·微藻产油的发展现状 | 第36-38页 |
| ·微藻产油的广阔前景 | 第36-37页 |
| ·面临的问题 | 第37-38页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第39-51页 |
| ·实验材料 | 第39-43页 |
| ·供试菌株 | 第39页 |
| ·供试质粒 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·酶、试剂和材料 | 第41页 |
| ·仪器和设备 | 第41-42页 |
| ·主要缓冲液和抗生素的配制 | 第42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-51页 |
| ·普通PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·DNA胶回收 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(TB法) | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第45页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第45页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化(碱裂解法) | 第45-46页 |
| ·细菌接合转移实验 | 第46-47页 |
| ·莱茵衣藻的培养 | 第47页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化(玻璃珠震荡法) | 第47页 |
| ·衣藻总DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·衣藻总RNA的提取(Trizol试剂法) | 第48页 |
| ·cDNA第一条链的反转录合成 | 第48-49页 |
| ·相对荧光实时定量PCR | 第49-50页 |
| ·光密度分析莱茵衣藻的生长状况 | 第50页 |
| ·尼罗红染色荧光分光光度法快速检测莱茵衣藻中性脂相对含量 | 第50-51页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第51-67页 |
| ·ACP1和RCA2干扰靶的设计 | 第51-52页 |
| ·miRNA表达载体的构建 | 第52-59页 |
| ·miRNA供体载体的构建 | 第53-56页 |
| ·供体载体pRTK-acp1的构建 | 第53-54页 |
| ·供体载体pRTK-rca2的构建 | 第54-56页 |
| ·miRNA受体表达载体的构建 | 第56-59页 |
| ·受体载体pmiR1162-acp1的构建 | 第57-58页 |
| ·受体载体pmiR1162-rca2的构建 | 第58-59页 |
| ·转基因藻株的获得 | 第59-62页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化结果 | 第59-60页 |
| ·表达载体pmiR1162-acp1在莱茵衣藻中的遗传转化 | 第59页 |
| ·表达载体pmiRl162-rca2在莱茵衣藻中的遗传转化 | 第59-60页 |
| ·莱茵衣藻转化子的鉴定 | 第60-62页 |
| ·amiR-ACP1转化子的鉴定 | 第60-61页 |
| ·amiR-RCA2转化子的鉴定 | 第61-62页 |
| ·转基因藻株的干扰效果分析 | 第62-64页 |
| ·荧光实时定量PCR的引物设计 | 第62-63页 |
| ·干扰效果分析 | 第63-64页 |
| ·生长状态分析 | 第64-65页 |
| ·细胞内油脂含量变化的分析 | 第65-67页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第67-70页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·MicroRNA在莱茵衣藻中的干扰效果 | 第67页 |
| ·ACP1基因下调的影响 | 第67-68页 |
| ·RCA2基因下调的影响 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
