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拟南芥抗核盘菌相关基因的克隆与分析

摘要第1-9页
Abstract第9-10页
1 引言第10-20页
   ·模式植物拟南芥第10页
   ·核盘菌是一类重要的兼性寄生菌第10-12页
     ·核盘菌的分类地位和特征第10-11页
     ·核盘菌引起严重的病害第11页
     ·核盘菌侵染方式和致病机理第11-12页
   ·油菜菌核病造成严重经济损失第12-15页
     ·油菜的种植和分布第12-13页
     ·油菜菌核病造成严重经济损失第13页
     ·油菜菌核病的特征第13页
     ·油菜菌核病流行及综合防治第13-15页
   ·植物抗病性研究第15-19页
     ·植物抗病性的概念第16页
     ·植物的抗病机制第16-17页
     ·抗病基因及抗病相关信号转导途径第17-19页
   ·本研究的目的及意义第19-20页
2 材料与方法第20-32页
   ·材料第20-21页
     ·植物材料第20页
     ·菌株及载体第20页
     ·酶及试剂第20-21页
     ·培养基的配方第21页
     ·抗生素的配制及使用第21页
   ·实验方法与步骤第21-32页
     ·拟南芥的培养第22页
     ·拟南芥基因组DNA的提取第22页
     ·TriZol法提取拟南芥总RNA第22-23页
     ·RT-PCR第23-24页
     ·Real-time Fluorescent Quantitive PCR第24-25页
     ·PCR产物及酶切液的回收第25页
     ·片段及载体的双酶切第25-26页
     ·PCR产物的连接第26页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第26-27页
     ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞第27页
     ·重组克隆的PCR鉴定第27页
     ·质粒的抽提第27-28页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第28-29页
     ·重组质粒载体转化农杆菌感受态细胞第29页
     ·重组克隆的PCR鉴定第29页
     ·拟南芥浸花转化第29页
     ·油菜转化第29-30页
     ·转基因阳性植株的筛选第30-31页
     ·抗病性的鉴定第31-32页
3 结果与分析第32-44页
   ·鉴定受核盘菌诱导表达的基因第32-34页
     ·RT-PCR方法鉴定受核盘菌诱导表达的基因第32页
     ·实时荧光定量PCR方法鉴定受核盘菌诱导表达的基因第32-34页
   ·目的基因过表达载体的构建和农杆菌转化第34-38页
     ·目的基因的克隆和过表达载体的构建第34-36页
     ·目的基因过量表达载体转化农杆菌GV3101第36-38页
   ·拟南芥的转化及筛选第38-39页
     ·拟南芥的转化及抗性植株的筛选第38页
     ·培养皿筛选T_2代和T_3代抗性幼苗第38-39页
   ·转基因植株中基因表达量的分析第39页
   ·抗病性鉴定第39-42页
     ·转基因植株的抗病性检测第39-41页
     ·T-DNA插入突变体的抗病性检测第41-42页
   ·油菜的转化及筛选第42-44页
4 全文总结与讨论第44-48页
   ·拟南芥抗病性鉴定方法的优选第44页
   ·抗菌核病途径的探讨第44页
   ·油菜转化方法的初探第44-45页
   ·BOS1在植物抗性中的功能第45页
   ·VSP1在植物抗性中的功能第45-46页
   ·TCH3在植物抗性中的功能第46页
   ·PAD3在植物抗性中的功能第46-47页
   ·后续研究第47-48页
参考文献第48-57页
附录第57-65页
致谢第65页

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