| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| ·蜡梅的研究与利用 | 第11页 |
| ·病程相关蛋白的发现 | 第11页 |
| ·病程相关蛋白(PRs)的分类及特征 | 第11-14页 |
| ·病程相关蛋白的生物化学和分子结构特性 | 第14-15页 |
| ·病程相关蛋白的分布及诱导 | 第15-16页 |
| ·病程相关蛋白的分布 | 第15页 |
| ·病程相关蛋白的诱导及诱导因子 | 第15-16页 |
| ·病程相关蛋白的抗病机制 | 第16-17页 |
| ·病程相关蛋白的功能 | 第17-19页 |
| ·抑制细菌、真菌的生长或病毒的复制 | 第17-18页 |
| ·固化细胞壁 | 第18页 |
| ·诱导植物抗毒素和细胞内毒素 | 第18页 |
| ·调控植物的生长发育 | 第18-19页 |
| ·病程相关蛋白PR-4家族 | 第19-21页 |
| ·PR-4家族的发现 | 第19页 |
| ·PR-4家族的特性 | 第19页 |
| ·PR-4家族的功能 | 第19-21页 |
| 第2章 引言 | 第21-23页 |
| ·研究背景 | 第21页 |
| ·研究意义 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-23页 |
| 第3章 蜡梅病程相关蛋白基因CpPR-4的克隆与序列分析 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·植物材料,菌株及载体 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·主要化学试剂 | 第23页 |
| ·自配的试剂及常用配方 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·EST序列特征分析 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·蜡梅总DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25页 |
| ·BioSpin Gel Extraction kit回收目的DNA片段 | 第25页 |
| ·回收纯化产物与pMD19-T载体连接 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中 | 第26页 |
| ·转化子的鉴定 | 第26页 |
| ·测序分析 | 第26-27页 |
| ·生物信息学分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·蜡梅CpPR-4克隆子的获得 | 第27-28页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因cDNA的序列特征 | 第28页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的同源比对 | 第28-30页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的信号肽分析 | 第30页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的疏水性区域分析 | 第30-31页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的二级结构预测 | 第31页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的三级结构预测 | 第31-32页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的磷酸化位点分析 | 第32页 |
| ·CpPR-4基因编码蛋白的卷曲螺旋分析 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第4章 植物表达载体的构建与转化烟草研究 | 第35-49页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株与载体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·自配的试剂 | 第35-36页 |
| ·常用培养基配方 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-41页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA2301g/CpPR-4 | 第36-39页 |
| ·CpPR-4基因导入烟草及转化植株的获得 | 第39页 |
| ·转基因植株的检测 | 第39-40页 |
| ·转基因烟草的抗病性鉴定试验 | 第40页 |
| ·转基因烟草的低温胁迫性实验 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·CpPR-4基因转化烟草以及转化植株的获得 | 第42-43页 |
| ·转基因植株的检测 | 第43-44页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因转基因烟草的抗病性鉴定试验 | 第44-45页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因转基因烟草的低温胁迫性实验 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-49页 |
| 第5章 原核表达载体的构建与目的蛋白的融合表达 | 第49-63页 |
| ·实验材料 | 第49-52页 |
| ·实验菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要设备 | 第49-50页 |
| ·自配的主要试剂 | 第50-52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达 | 第54-55页 |
| ·表达体系的优化 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-61页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因原核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·pET-32a/CpPR-4在BL21(DE3)中的融合表达 | 第57-59页 |
| ·表达体系的优化 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第6章 讨论 | 第63-67页 |
| ·蜡梅CpPR-4基因的克隆及编码蛋白的特性 | 第63页 |
| ·植物表达载体的构建及烟草的遗传转化体系 | 第63-64页 |
| ·转基因烟草的抗病性分析 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草的抗寒性分析 | 第65页 |
| ·原核表达载体的构建及重组蛋白表达体系的优化 | 第65-67页 |
| 第7章 总结 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67页 |
| ·后续工作 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 缩略词表 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 发表论文与参加的研究课题 | 第80页 |
