| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 热休克蛋白与盐度适应的研究进展 | 第14-20页 |
| 1 热休克蛋白 | 第14-17页 |
| ·HSP100 家族 | 第15页 |
| ·HSP90 家族 | 第15页 |
| ·HSP70 家族 | 第15-16页 |
| ·HSP60 家族 | 第16页 |
| ·sHSP 家族 | 第16-17页 |
| 2 热休克蛋白与盐度适应的研究进展 | 第17-20页 |
| 第二章 三疣梭子蟹热休克蛋白 HSP60 与盐度适应的相关性研究 | 第20-45页 |
| 1 材料与方法 | 第20-29页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·仪器与试剂 | 第20-23页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·HSP60 序列克隆与分析 | 第23-26页 |
| ·总 RNA 提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA 模板合成 | 第24页 |
| ·HSP60 ORF 片段 PCR 扩增 | 第24页 |
| ·割胶回收 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·ORF 片段连接与转化 | 第25页 |
| ·HSP60 的序列分析 | 第25-26页 |
| ·各组织样品 HSP60 mRNA 半定量 RT-PCR | 第26页 |
| ·各组织样品 cDNA 模板合成 | 第26页 |
| ·各组织样品 HSP60 mRNA 半定量 RT-PCR | 第26页 |
| ·光密度分析 | 第26页 |
| ·各鳃样品 HSP60 mRNA 半定量 RT-PCR | 第26-27页 |
| ·各鳃样品 cDNA 模板合成 | 第26页 |
| ·各鳃样品 HSP60 mRNA 半定量 RT-PCR | 第26-27页 |
| ·光密度分析 | 第27页 |
| ·各鳃样品 HSP60 蛋白半定量分析 | 第27-29页 |
| ·蛋白提取 | 第27页 |
| ·蛋白浓度测定： | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·半干转印 | 第28页 |
| ·免疫印迹 | 第28-29页 |
| ·光密度分析 | 第29页 |
| 2 结果分析 | 第29-43页 |
| ·ORF 片段克隆 | 第29-30页 |
| ·序列分析 | 第30-34页 |
| ·HSP60 同源性分析 | 第34-38页 |
| ·盐度胁迫前后三疣梭子蟹各组织 HSP60 mRNA 表达分析 | 第38-40页 |
| ·盐度胁迫下三疣梭子蟹鳃 HSP60 mRNA 表达分析 | 第40-41页 |
| ·蛋白提取和蛋白浓度测定结果 | 第41-42页 |
| ·免疫印迹结果 | 第42-43页 |
| ·盐度胁迫下三疣梭子蟹鳃 HSP60 蛋白表达分析 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 三疣梭子蟹热休克蛋白 HSP90α与盐度适应的相关性研究 | 第45-56页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·仪器与试剂 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·各鳃样品 HSP90α mRNA 半定量 RT-PCR | 第46页 |
| ·三疣梭子蟹鳃 HSP90α原核表达实验 | 第46-49页 |
| ·HSP90α ORF 引物设计及合成 | 第46页 |
| ·三疣梭子蟹鳃 HSP90α ORF PCR 扩增 | 第46-47页 |
| ·HSP90 ORF 目的片段割胶回收 | 第47页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·目的片段连接与转化 | 第47页 |
| ·pMD18-HSP90α质粒提取 | 第47-48页 |
| ·质粒双酶切 | 第48页 |
| ·HSP90α ORF 目的片段回收、连接、转化 | 第48页 |
| ·pET28-HSP90α重组质粒的诱导表达 | 第48页 |
| ·正常情况下大肠杆菌的生长曲线测定 | 第48页 |
| ·不同盐度胁迫下的大肠杆菌生长情况 | 第48-49页 |
| 2 结果分析 | 第49-54页 |
| ·盐度胁迫下三疣梭子蟹鳃 HSP90α mRNA 表达分析 | 第49-50页 |
| ·三疣梭子蟹鳃 HSP90α原核表达载体的构建及重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·pET28-HSP90α重组质粒的诱导表达 | 第51页 |
| ·正常情况下大肠杆菌的生长曲线 | 第51-52页 |
| ·不同盐度下的大肠杆菌生长情况 | 第52-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 三疣梭子蟹热休克蛋白盐度适应功能的探讨 | 第56-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
