| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 引言 | 第13-22页 |
| 一、研究背景 | 第13-20页 |
| 1.苦瓜 | 第13-15页 |
| 2.核糖体失活蛋白 | 第15-17页 |
| 3.细胞凋亡途径 | 第17-20页 |
| 二、本研究的目的、意义、内容及研究路线 | 第20-22页 |
| 1.研究目的及意义 | 第20页 |
| 2.研究内容 | 第20-21页 |
| 3.研究路线 | 第21-22页 |
| 第一章 苦瓜MAP30基因的克隆表达及纯化 | 第22-34页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌种及载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要溶液及配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·苦瓜基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·MAP30基因的扩增 | 第25页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·目的基因T-A克隆和鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的构建和鉴定 | 第27-28页 |
| ·DNA序列测定与生物信息学分析 | 第28页 |
| ·融合蛋白表达条件的优化 | 第28页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·MAP30基因的T-A克隆和鉴定 | 第29-30页 |
| ·原核表达载体的构建鉴定 | 第30-31页 |
| ·氨基酸序列的同源性比较 | 第31页 |
| ·不同IPTG浓度对目的蛋白表达的影响 | 第31-32页 |
| ·不同诱导时间对目的蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 第二章 MAP30蛋白诱导BGC823细胞凋亡及其凋亡途径的初步研究 | 第34-50页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·细胞系和培养基 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液及配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·细胞培养 | 第36页 |
| ·形态观察 | 第36页 |
| ·细胞计数 | 第36-37页 |
| ·MTT法测定MAP30蛋白对细胞增殖的影响 | 第37页 |
| ·流式细胞仪检测MAP30诱导BGC-823细胞凋亡 | 第37页 |
| ·JC-1检测BGC-823细胞线粒体膜电位变化 | 第37页 |
| ·荧光实时定量PCR检测BGC-823细胞的caspase-9和Apaf1 mRNA的表达 | 第37-38页 |
| ·分光光度法检测BGC-823细胞的Caspase-3的活性 | 第38-39页 |
| ·荧光酶标仪检测BGC-823细胞的Caspase-12活性 | 第39-40页 |
| ·免疫细胞化学法检测BGC-823细胞的NF-κB的表达 | 第40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-47页 |
| ·MAP30对BGC-823细胞生长的影响 | 第40-43页 |
| ·MAP30诱导BGC-823细胞凋亡及凋亡机制 | 第43-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 主要结论与展望 | 第50-51页 |
| ·主要结论 | 第50页 |
| ·展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 硕士期间发表的论文和参加的课题 | 第57页 |
