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SOCS3真核表达载体构建及其对脂肪细胞凋亡的影响

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
第一章 SOCS 在生命机体中的作用研究第13-18页
   ·SOCS 家族概述第14-16页
     ·SOCS 结构第14-15页
     ·SOCS 合成与降解第15页
     ·SOCS 在代谢中的作用第15页
     ·SOCS 在免疫系统中的作用第15页
     ·SOCS 与糖尿病第15-16页
   ·SOCS3 信号通路作用机制第16-18页
第二章 细胞凋亡机制研究进展第18-22页
   ·细胞凋亡的特征第18页
   ·分子机制第18-20页
     ·凋亡相关的基因和蛋白第18-19页
     ·信号途径第19-20页
     ·其它凋亡因素第20页
   ·检测方法第20-21页
     ·ELISA 法第20页
     ·原位末端转移酶标记技术第20-21页
     ·DNA 电泳第21页
     ·流式细胞分析第21页
     ·透射电镜检测第21页
     ·生物传感器检测第21页
   ·展望第21-22页
第三章 PEGFP-N1-SOCS3 载体构建第22-28页
   ·材料与方法第22-25页
     ·材料第22页
     ·RNA 提取(Trizol)第22-23页
     ·反转录第23页
     ·PCR 扩增第23-24页
     ·克隆产物的鉴定第24页
     ·感受态细胞制备及转染第24-25页
   ·结果与分析第25-26页
     ·脂肪组织提取RNA 的完整性检测结果第25页
     ·RT-PCR 结果检测 β-actin 及 SOCS3 扩增产物的鉴定第25页
     ·重组质粒的鉴定第25-26页
   ·讨论第26-28页
第四章 SOCS3 生物信息学分析第28-34页
   ·方法第28页
     ·SOCS3 理化性质分析第28页
     ·SOCS3 蛋白的信号肽分析第28页
     ·SOCS3 蛋白的细胞定位分析第28页
     ·SOCS3 蛋白结构分析第28页
   ·结果第28-32页
     ·SOCS3 理化性质分析结果第28-29页
     ·SOCS3 蛋白的信号肽分析结果第29-30页
     ·SOCS3 蛋白的细胞定位分析结果第30页
     ·SOCS3 蛋白结构分析结果第30-32页
   ·讨论第32-34页
第五章 pEGFP-N1-SOCS3 对3T3-L1 细胞凋亡的影响第34-43页
   ·材料与方法第34-38页
     ·材料、试剂、仪器第34-35页
     ·细胞培养及转染第35页
     ·转染重组质粒的3T3-L1 脂肪细胞GFP 表达的观察第35页
     ·Hoechst 33258 染色第35页
     ·RT-PCR 检测相关基因的表达第35-36页
     ·蛋白的提取以及表达分析第36-38页
     ·检测3T3-L1 细胞系中SOCS3 mRNA 和SOCS3 蛋白表达第38页
     ·凋亡相关基因Bax 和c-myc 和bcl-2 和mcl-1 基因的表达第38页
   ·结果与分析第38-41页
     ·重组质粒pEGFP-N1-SOCS3 转染3T3-L1 细胞GFP 表达的观察第38页
     ·重组质粒pEGFP-N1-SOCS3 转染3T3-L1 细胞中SOCS3 mRNA 和蛋白表达检测第38-40页
     ·SOCS3 对3T3-L1 细胞凋亡的观察第40页
     ·凋亡相关基因Bax、c-myc 和bcl-2、mcl-1 基因的表达第40-41页
   ·讨论第41-43页
第六章 pEGFP-N1-SOCS3 对小鼠前体脂肪细胞凋亡的影响第43-50页
   ·材料与方法第43-45页
     ·材料、试剂、仪器第43页
     ·实验动物第43页
     ·细胞培养及转染第43页
     ·转染重组质粒的前体脂肪细胞GFP 表达的观察第43页
     ·RT-PCR 检测相关基因的表达第43-44页
     ·蛋白的提取以及表达分析第44页
     ·检测前体脂肪细胞细胞系中SOCS3 mRNA 和SOCS3 蛋白表达第44-45页
     ·凋亡相关基因Bax、c-myc、survivin 以及bcl-2、mcl-1 和NF-κB 基因的表达第45页
     ·SOCS3 对JAK2、STAT3 的影响第45页
     ·SOCS3 超表达对SOCS2 表达的影响第45页
   ·结果与分析第45-48页
     ·重组质粒pEGFP-N1-SOCS3 转染前体脂肪细胞GFP 表达的观察第45-46页
     ·重组质粒pEGFP-N1-SOCS3 转染前体脂肪细胞中SOCS3 m RNA 和蛋白表达检测第46页
     ·凋亡相关基因Bax、c-myc、survivin 以及bcl-2、mcl-1 和NF-κB 基因的表达第46-47页
     ·重组载体pEGFP-N1-SOCS3 对JAK2、STAT3 表达的影响第47页
     ·重组载体pEGFP-N1-SOCS3 对SOCS2 表达的影响第47-48页
   ·讨论第48-50页
结论第50页
本试验研究的创新点第50-51页
参考文献第51-56页
致谢第56-57页
作者简介第57页

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