中文摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
前言 | 第11-16页 |
材料和方法 | 第16-33页 |
1. 实验材料与试剂 | 第16-18页 |
·细胞系 | 第16页 |
·实验动物 | 第16页 |
·仪器设备 | 第16-17页 |
·实验试剂 | 第17-18页 |
2. 研究方法 | 第18-33页 |
·细胞培养 | 第18页 |
·棕榈酸盐(Palmitate)及其他相关药物配制 | 第18-19页 |
·小鼠胰岛细胞的分离和培养 | 第19-21页 |
·胰岛β细胞的分离与纯化 | 第19-20页 |
·胰岛细胞的鉴定 | 第20-21页 |
·原代胰岛β细胞的培养 | 第21页 |
·总 RNA 的提取 | 第21-22页 |
·提取总 RNA | 第21页 |
·紫外定量和检测 | 第21页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
·Real-time RT-PCR | 第22-24页 |
·cDNA 的合成 | 第22-23页 |
·相关引物合成 | 第23-24页 |
·Real-time RT-PCR 反应 | 第24页 |
·蛋白质的抽提及浓度测定 | 第24-26页 |
·提取总蛋白 | 第24-25页 |
·抽提核蛋白 | 第25页 |
·BCA 试剂盒测定蛋白浓度 | 第25-26页 |
·免疫印迹(Western blot) | 第26-29页 |
·蛋白变性 | 第26页 |
·蛋白电泳 | 第26-28页 |
·转膜(半干转) | 第28页 |
·封闭 | 第28-29页 |
·抗体孵育 | 第29页 |
·ECL 检测 | 第29页 |
·MTT 法 | 第29页 |
·Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡 | 第29-30页 |
·EdU 荧光标记细胞增殖实验 | 第30-31页 |
·RNAi | 第31-32页 |
·siRNA 片段的合成 | 第31页 |
·siRNA 瞬时转染 | 第31-32页 |
·流式细胞术检测细胞周期 | 第32页 |
·数据处理 | 第32-33页 |
结果 | 第33-38页 |
1. 糖脂毒性诱导胰岛β细胞 TLR3 表达上调 | 第33页 |
2. TLR3 激活抑制胰岛β细胞的生长活力 | 第33-34页 |
3. TLR3 激活剂促进胰岛β细胞凋亡 | 第34页 |
4. TLR3 功能上调抑制胰岛β细胞增殖 | 第34-35页 |
5. TLR3 激活参与调控胰岛β细胞周期 G1 期阻滞 | 第35页 |
6. TLR3 激活导致胰岛β细胞周期相关蛋白 cyclin D1 和 D2 表达下调 | 第35-36页 |
7. 泛素-蛋白酶体介导的蛋白降解途径参与调节 cyclin D1 和 D2 的表达下调 | 第36页 |
8. Poly (I:C)诱导的胰岛β细胞增殖抑制不依赖 JNK 的激活 | 第36-38页 |
实验数据及英文注释 | 第38-53页 |
讨论 | 第53-57页 |
小结 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-64页 |
附录(一)综述 | 第64-79页 |
参考文献 | 第74-79页 |
附录(二)缩略词表 | 第79-81页 |
附录(三)发表文章 | 第81-82页 |
致谢 | 第82页 |