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Toll样受体3抑制胰岛β细胞生长机制研究

中文摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
前言第11-16页
材料和方法第16-33页
 1. 实验材料与试剂第16-18页
   ·细胞系第16页
   ·实验动物第16页
   ·仪器设备第16-17页
   ·实验试剂第17-18页
 2. 研究方法第18-33页
   ·细胞培养第18页
   ·棕榈酸盐(Palmitate)及其他相关药物配制第18-19页
   ·小鼠胰岛细胞的分离和培养第19-21页
     ·胰岛β细胞的分离与纯化第19-20页
     ·胰岛细胞的鉴定第20-21页
     ·原代胰岛β细胞的培养第21页
   ·总 RNA 的提取第21-22页
     ·提取总 RNA第21页
     ·紫外定量和检测第21页
     ·琼脂糖凝胶电泳第21-22页
   ·Real-time RT-PCR第22-24页
     ·cDNA 的合成第22-23页
     ·相关引物合成第23-24页
     ·Real-time RT-PCR 反应第24页
   ·蛋白质的抽提及浓度测定第24-26页
     ·提取总蛋白第24-25页
     ·抽提核蛋白第25页
     ·BCA 试剂盒测定蛋白浓度第25-26页
   ·免疫印迹(Western blot)第26-29页
     ·蛋白变性第26页
     ·蛋白电泳第26-28页
     ·转膜(半干转)第28页
     ·封闭第28-29页
     ·抗体孵育第29页
     ·ECL 检测第29页
   ·MTT 法第29页
   ·Hoechst 33258 染色检测细胞凋亡第29-30页
   ·EdU 荧光标记细胞增殖实验第30-31页
   ·RNAi第31-32页
     ·siRNA 片段的合成第31页
     ·siRNA 瞬时转染第31-32页
   ·流式细胞术检测细胞周期第32页
   ·数据处理第32-33页
结果第33-38页
 1. 糖脂毒性诱导胰岛β细胞 TLR3 表达上调第33页
 2. TLR3 激活抑制胰岛β细胞的生长活力第33-34页
 3. TLR3 激活剂促进胰岛β细胞凋亡第34页
 4. TLR3 功能上调抑制胰岛β细胞增殖第34-35页
 5. TLR3 激活参与调控胰岛β细胞周期 G1 期阻滞第35页
 6. TLR3 激活导致胰岛β细胞周期相关蛋白 cyclin D1 和 D2 表达下调第35-36页
 7. 泛素-蛋白酶体介导的蛋白降解途径参与调节 cyclin D1 和 D2 的表达下调第36页
 8. Poly (I:C)诱导的胰岛β细胞增殖抑制不依赖 JNK 的激活第36-38页
实验数据及英文注释第38-53页
讨论第53-57页
小结第57-58页
参考文献第58-64页
附录(一)综述第64-79页
 参考文献第74-79页
附录(二)缩略词表第79-81页
附录(三)发表文章第81-82页
致谢第82页

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