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菲律宾蛤仔(Venerupis philippinarum)在苯并(a)芘胁迫下差异基因的筛选与分子生物标志物的研究

摘要第1-8页
Abstract第8-17页
前言第17-19页
第一章 文献综述第19-43页
 1 近岸海域多环芳烃污染状况第20-26页
   ·多环芳烃的来源及分布第20-23页
     ·环境中 PAHs 的来源第20-21页
     ·环境中 PAHs 的分布第21-23页
   ·多环芳烃的毒理学特征第23页
     ·PAHs 的致癌性第23页
     ·PAHs 的光致毒效应第23页
     ·PAHs 衍生物的毒理效应第23页
   ·海洋环境中 PAHs 污染现状第23-26页
     ·海水中 PAHs 污染状况第24-25页
     ·海洋沉积物 PAHs 污染状况第25-26页
 2 PAHs 监测技术研究进展第26-34页
   ·PAHs 化学监测法第26页
   ·PAHs 生物监测法第26-27页
   ·生物标志物技术第27-30页
     ·生物标志物分类第27-29页
     ·生物标志物筛选原则第29-30页
   ·分子生物标志物研究进展第30-34页
     ·大分子氧化损伤类生物标志物的研究第30-31页
     ·其他酶蛋白作为分子标志物的研究第31-32页
     ·基因差异表达作为分子生物标志物的研究第32页
     ·贝类分子生物标志物研究进展第32-34页
 3 差异表达基因筛选技术及研究进展第34-40页
   ·几种差异表达基因筛选方法及特点第34-37页
     ·mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR)第34-35页
     ·代表性差异分析技术(RDA)第35页
     ·基因表达系列分析技术(SAGE)第35-36页
     ·DNA 微阵列技术(DNA microarray)第36页
     ·抑制消减杂交技术(SSH)第36-37页
   ·抑制性消减杂交原理及主要技术流程第37-38页
     ·抑制性消减杂交原理第37-38页
     ·抑制性消减杂交主要技术流程第38页
   ·抑制性消减杂交技术在水产动物研究中的应用第38-40页
     ·生殖、发育相关基因的研究第39页
     ·免疫相关基因的研究第39-40页
     ·逆境胁迫相关基因第40页
 4 论文立题依据、研究内容和意义第40-43页
第二章 菲律宾蛤仔芳烃受体(AhR)介导的关键基因克隆与表达分析第43-77页
 第一节 菲律宾蛤仔 AhR 介导的关键基因的克隆与序列分析第45-71页
  1 材料方法第45-56页
   ·实验材料第45-48页
     ·实验动物第45页
     ·引物第45页
     ·主要试剂第45-48页
     ·主要实验仪器第48页
   ·实验方法第48-55页
     ·总 RNA 的提取第48页
     ·去除 RNA 中的基因组 DNA第48-49页
     ·cDNA 第一链的合成第49-50页
     ·AhR、ARNT 和 HSP 90 基因的克隆第50-52页
     ·AhR 基因全序列扩增第52-54页
     ·AhR、ARNT 和 HSP 90 基因序列的生物信息学分析第54页
     ·AhR、ARNT 和 HSP 90 实时定量表达分析第54-55页
   ·数据处理与分析第55-56页
  2 结果第56-67页
   ·菲律宾蛤仔 AhR 克隆与序列分析第56-61页
   ·菲律宾蛤仔 ARNT 克隆与序列分析第61-63页
   ·菲律宾蛤仔 HSP 90 克隆与序列分析第63-66页
   ·菲律宾蛤仔中 AhR、ARNT 和 HSP 90 基因组织特异性分析第66-67页
  3 讨论第67-71页
 第二节 菲律宾蛤仔在苯并(a)芘胁迫下解毒代谢相关基因的表达分析第71-77页
  1 材料方法第71-72页
   ·实验材料第71页
     ·实验动物第71页
     ·引物第71页
     ·主要试剂和实验仪器第71页
   ·实验方法第71-72页
     ·染毒实验第71-72页
     ·菲律宾蛤仔解毒代谢基因 mRNA 表达分析第72页
   ·数据处理与分析第72页
  2 结果第72-74页
  3 讨论第74-77页
第三章 菲律宾蛤仔在苯并(a)芘胁迫下 cDNA 消减文库的构建与分析第77-108页
 第一节 菲律宾蛤仔在苯并(a)芘胁迫下 cDNA 消减文库的构建第78-93页
  1 材料方法第78-87页
   ·实验材料第78-79页
     ·实验动物第78页
     ·主要试剂第78页
     ·主要实验仪器第78页
     ·接头和引物第78-79页
   ·实验方法第79-87页
     ·染毒实验第79页
     ·总 RNA 的提取及去除 RNA 中的基因组 DNA第79页
     ·Poly A+RNA 的分离纯化与浓缩第79-80页
     ·抑制性消减杂交第80-87页
     ·cDNA 消减文库构建第87页
  2 结果第87-90页
   ·总 RNA 质量鉴定第87-88页
   ·双链 cDNA 合成和 Rsa I 酶切效率验证第88页
   ·接头连接效率检测第88-89页
   ·抑制性 PCR 扩增消减杂交产物的鉴定第89页
   ·消减杂交效率验证第89-90页
   ·消减 cDNA 文库的构建第90页
  3 讨论第90-93页
 第二节 菲律宾蛤仔在苯并(a)芘胁迫下差异基因表达分析第93-108页
  1 材料方法第93-95页
   ·实验材料第93页
     ·研究对象第93页
     ·主要试剂第93页
     ·载体通用引物第93页
     ·主要实验仪器第93页
   ·实验方法第93-95页
     ·文库质量分析第93-94页
     ·重组质粒测序第94页
     ·序列分析第94-95页
  2 结果第95-105页
   ·文库重组率及重组克隆中插入片段大小分析第95页
   ·消减 cDNA ESTs 序列统计与分析第95-105页
  3 讨论第105-108页
第四章 菲律宾蛤仔在苯并(a)芘胁迫下分子生物标志物的筛选与验证第108-128页
 1 材料方法第109-114页
   ·实验材料第109-111页
     ·实验动物第109页
     ·实验试剂第109页
     ·引物第109-111页
     ·主要实验仪器第111页
   ·实验方法第111-114页
     ·染毒实验第111-112页
     ·总 RNA 的提取及 cDNA 模板的合成第112页
     ·实时定量 PCR 及 mRNA 表达分析第112页
     ·分子生物标志物技术的现场验证第112-114页
   ·数据处理与分析第114页
 2 结果第114-124页
   ·BaP 胁迫对菲律宾蛤仔不同功能基因表达的影响第114-121页
   ·不同站点表层海水和菲律宾蛤仔组织中 PAHs 含量的测定第121-122页
   ·不同站点菲律宾蛤仔的功能基因 mRNA 表达分析第122-124页
 3 讨论第124-128页
论文结论第128-129页
参考文献第129-148页
附件第148-158页
 炔雌醇对淡水贝 Ellipsaria lineolata 生殖发育的影响第148-158页
  1 引言第148-149页
  2 材料方法第149-151页
   ·实验动物第149-150页
   ·实验方法第150-151页
     ·贻贝的性别鉴定第150页
     ·染毒实验第150页
     ·生殖发育指标的检测第150-151页
   ·数据处理与分析第151页
  3 结果与讨论第151-156页
   ·蝴蝶贻贝的性别鉴定第151-152页
   ·EE2对蝴蝶贻贝排卵、排精的影响第152-156页
  4 结论第156页
  参考文献第156-158页
致谢第158-160页
个人简历第160-161页
论文发表情况第161页

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