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云南省植原体株系及其相关病害的多样性研究

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-17页
第一章 文献综述第17-74页
 第一节 植原体与植原体病害第17-24页
   ·植原体的发现第17页
   ·柔膜菌纲原核生物的分类第17-18页
   ·分子进化研究与植原体的归属及概念第18-20页
   ·植原体的基本形态和超微结构第20-22页
   ·植原体的生理特征第22页
   ·植原体的传播和移动第22-23页
   ·植原体病害症状特点及为害第23-24页
 第二节 植原体的检测与鉴定研究第24-39页
   ·显微研究技术第24-28页
     ·光学显微技术(Light Microscopy)第24-25页
     ·荧光显微技术(Fluorescence Microscopy)第25-26页
     ·透射电镜显微技术(Transmission electron microscopy, TEM)第26-28页
     ·扫描电镜技术(Scanning electron microscopy)第28页
     ·细胞化学技术(Cytochemical methods)第28页
   ·血清学检测技术第28-29页
   ·DNA分子杂交技术第29-31页
     ·点印迹杂交分析法第29-30页
     ·原位杂交第30页
     ·Southern杂交/RFLP第30-31页
   ·PCR技术第31-39页
     ·巢式PCR(Nested-PCR)第31-32页
     ·免疫捕获PCR(Immuno-capture-PCR, IC-PCR)第32-33页
     ·循环PCR(Recycled PCR)第33页
     ·原位PCR(In situ PCR)第33页
     ·竞争PCR(Competitive PCR)第33-34页
     ·实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR, RTF-PCR)第34-39页
 第三节 植原体的分子生物多样性研究第39-66页
   ·植原体的遗传多样性研究第39-47页
     ·遗传多样性的起源第39-41页
     ·遗传多样性的重要性第41-42页
     ·遗传多样性的研究方法第42-47页
   ·植原体的物种多样性研究第47-64页
     ·微生物系统发育多样性的特点第48-49页
     ·用于植原体系统发育研究的分子标记第49-55页
     ·植原体的分类第55-59页
     ·植原体的命名第59-64页
   ·植原体的生态多样性第64-66页
     ·植原体的地理分布第64页
     ·植原体的寄主特异性第64页
     ·介体-植原体-寄主的相互关系第64-66页
 第四节 植原体的基因组研究第66-72页
   ·植原体基因组主要特性第66-70页
     ·植原体基因组大小第66-67页
     ·植原体染色体和质粒的主要特征第67-70页
   ·植原体的膜蛋白(membrane proteins)第70-71页
   ·植原体的代谢第71-72页
   ·植原体的毒性第72页
 第五节 本研究的目的和总体思路第72-74页
   ·研究目的和意义第72-73页
   ·研究的总体思路第73-74页
第二章 实验部分第74-125页
 第一节 云南省植原体病害的种类鉴定第74-87页
   ·材料与方法第74-77页
     ·植原体病害的采集第74页
     ·植原体病害的分子鉴定第74-77页
   ·结果与分析第77-86页
     ·巢式PCR扩增结果第77页
     ·植原体病害症状表现第77-86页
   ·小结第86-87页
 第二节 云南省植原体株系系统发育多样性研究第87-94页
   ·材料与方法第87-90页
     ·材料来源第87页
     ·感病植株总DNA的提取和植原体165 rRNA基因PCR扩增第87页
     ·PCR产物的克隆和序列测定第87-89页
     ·16S rRNA序列系统演化分析第89-90页
   ·结果与分析第90-94页
     ·重组质粒的筛选第90页
     ·云南省植原体株系1651DNA的序列分析第90页
     ·云南省植原体株系系统进化树构建及分析第90-94页
   ·小结第94页
 第三节 仙人掌丛枝病植原体的遗传多样性研究第94-103页
   ·材料与方法第94-97页
     ·材料来源第94-95页
     ·感病植株总DNA提取第95-96页
     ·PCR扩增植原体165 rRNA基因片段第96页
     ·巢式PCR扩增产物序列测定和比对第96页
     ·计算机模拟1651DNA限制性酶切第96-97页
     ·遗传相似系数计算第97页
     ·构建遗传系统树状图谱第97页
   ·结果与分析第97-103页
     ·RFLP电子酶切图谱第97-100页
     ·任意两个仙人掌丛枝植原体株系间的遗传相似系数第100-102页
     ·29 个仙人掌丛枝植原体株系的系统聚类树状图谱第102页
     ·仙人掌丛枝植原体26 号株系的序列分析第102-103页
   ·小结第103页
 第四节 植原体实时荧光定量PCR方法的建立及其应用第103-117页
   ·材料与方法第104-106页
     ·材料来源和选取第104页
     ·感病组织总DNA提取第104页
     ·感病植原体株系165 rDNA的PCR扩增、产物克隆及序列测定第104页
     ·TaqMan探针与引物的设计和合成第104-105页
     ·定量PCR标准品和标准曲线的制作第105页
     ·实时荧光定量PCR检测及各反应条件的优化第105页
     ·实时荧光定量PCR检测植原体的反应体系的建立及应用第105-106页
   ·结果与分析第106-116页
     ·用于定量PCR的植原体病害的感病组织第106页
     ·感病组织不同部位总DNA浓度及用做标准品质粒的浓度第106-107页
     ·实时荧光定量PCR各反应条件的优化第107-112页
     ·植原体16SrII 组探针的特异性检测第112-113页
     ·感病植株中的植原体含量第113-116页
   ·小结第116-117页
 第五节 植原体病原形态电镜观察第117-125页
   ·材料与方法第117-118页
     ·材料来源第117页
     ·植物组织超薄切片制备第117-118页
     ·电镜观察第118页
   ·结果与分析第118-123页
     ·植原体的形态第118-121页
     ·植原体的发育第121-122页
     ·植原体的移动第122-123页
   ·小结第123-125页
第三章 讨论第125-134页
 第一节 云南省植原体病害种类的多样性第125-126页
   ·云南省首次报道的植原体病害的多样性第125页
   ·国内外首次报道的植原体病害第125-126页
 第二节 云南省植原体株系种类的多样性第126-129页
   ·云南省植原体株系的分布特点第126页
   ·泡桐丛枝病植原体株系的分类地位第126-127页
   ·长春花黄化植株植原体株系的复合侵染第127页
   ·我国报道的竹丛枝植原体株系的分类第127页
   ·引起桃树植原体病害的植原体株系第127-128页
   ·侵染苜蓿的植原体株系第128页
   ·不同症状表现的矮牵牛、百合植原体病害第128-129页
   ·国外报道的发生在柑橘属植物上的植原体病害第129页
 第三节 云南省仙人掌丛枝病植原体株系的遗传多样性第129-130页
   ·仙人掌丛枝植原体26 号株系的系统分类和来源第129-130页
   ·云南省仙人掌丛枝病植原体株系的遗传变异第130页
 第四节 实时荧光定量PCR技术检测定量感病组织中的植原体第130-133页
   ·技术应用的优点及本研究的特点第130-131页
   ·感病组织中植原体的分布与细胞数量比较第131-133页
 第五节 植原体感病组织的电镜观察第133-134页
   ·电镜观察植原体的局限性第133页
   ·植原体的形态与分类第133-134页
全文结论与创新点第134-135页
参考文献第135-150页
附录1 论文中使用的缩写词及中英文对照第150-153页
附录2 100 余号疑似植原体病害的症状表现及采集地第153-156页
附录3 29 个仙人掌丛枝植原体株系在GenBank中的登录号第156-157页
附录4 实验中常用试剂的配制第157-160页
致谢第160-161页
攻读博士学位论文期间发表的学术论文目录及获得的奖励第161页

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