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拟南芥小G蛋白RabD2b的表达、定位及功能研究

摘要第1-9页
Abstract第9-12页
縮略语表第12-13页
1 文献综述第13-35页
   ·小G蛋白第13-16页
     ·小G蛋白的发现和分类第13-14页
     ·小G蛋白的作用机制第14-15页
     ·小G蛋白的功能第15-16页
   ·Rab类小G蛋白第16-33页
     ·Rab蛋白的进化第16-20页
       ·不同物种Rab蛋白的分类第16-17页
       ·不同物种Rab蛋白的功能保守性第17-20页
     ·Rab蛋白的结构特点第20-22页
       ·Rab蛋白的保守结构域第20-22页
       ·Rab蛋白翻译后的修饰第22页
     ·Rab蛋白在植物体内的功能第22-33页
       ·Rab蛋白调节的囊泡运输功能第23-30页
       ·激素和光信号调节第30-31页
       ·生物和非生物胁迫第31-32页
       ·植物发育第32-33页
   ·本研究的目的、意义第33-35页
2 材料与方法第35-52页
   ·实验材料第35-36页
     ·质粒与菌株第35页
     ·植物材料第35-36页
   ·实验方法第36-52页
     ·蛋白质序列的比对第36页
     ·酵母表达载体的构建和酵母菌的转化第36-40页
       ·酵母表达载体的构建第36页
       ·载体构建的相关操作第36-39页
       ·酵母表达载体的转化第39-40页
     ·亚细胞定位载体的构建以及烟草细胞的瞬时转化第40-42页
       ·亚细胞定位载体的构建第40-42页
       ·烟草的瞬时转化第42页
       ·激光扫描共聚焦显微镜的观察第42页
     ·AtRabD基因在拟南芥不同组织中的表达分析第42-44页
       ·RT-PCR第42-44页
       ·GUS转基因植株的鉴定和染色第44页
     ·T-DNA纯合插入突变体的表型分析第44-45页
       ·T-DNA纯合插入突变体的分离和鉴定第44-45页
       ·双突变体的获得和鉴定第45页
     ·转基因植株的获得和转基因的表达分析第45-50页
       ·拟南芥的稳定转化和转基因植株的获得第45-46页
       ·AtRabD2b[Q67L]转基因植株的表达分析第46-50页
     ·茎半薄切片的制备第50-51页
     ·茎超薄切片的制备及透射电镜的观察第51-52页
3 结果与分析第52-76页
   ·AtRabD亚家族蛋白的同源性比对,表达模式及亚细胞定位分析第52-61页
     ·AtRabD亚家族蛋白的同源性分析第52-54页
     ·AtRabD2b转化酵母温敏突变体ypt1的互补测验第54-56页
     ·AtRabD2b的亚细胞定位及突变对定位的影响第56-59页
       ·AtRabD2b的亚细胞定位第56-57页
       ·重要结构域点突变对AtRabD2b亚细胞定位的影响第57-59页
     ·AtRabD2b的表达分析第59-61页
       ·RT-PCR检测AtRabD2b在不同组织中的表达情况第59-60页
       ·Gus组织染色检测AtRabD2b的时空表达情况第60-61页
   ·AtRabD2b的生理功能研究第61-72页
     ·T-DNA插入突变体的鉴定和表型分析第61-64页
     ·AtRabD基因的下调表达导致拟南芥茎顶端细胞的死亡第64-68页
       ·YFP-AtRabD2b[Q67L]转基因植株的表型分析第64-66页
       ·转基因植株的表型与AtRabD2b基因表达的关系第66-68页
     ·AtRabD2b基因共抑制植株中坏死茎段的细胞学观察第68-70页
     ·共抑制植株中坏死茎段细胞的超微结构观察第70-72页
   ·C末端保守半胱氨酸结构域对AtRabD2b亚细胞定位和功能的影响第72-76页
     ·C末端保守半胱氨酸突变对AtRabD2b亚细胞定位的影响第72-73页
     ·C末端保守半胱氨酸突变对AtRabD2b功能的影响第73-74页
     ·超表达野生型和突变型AtRabD2b的拟南芥植株出现不同的表型第74-76页
4 讨论第76-83页
   ·AtRabD2b在细胞内行使类似于Ypt1的囊泡运输功能第76-77页
   ·AtRabD2b的亚细胞定位受核苷酸结合状态的影响第77页
   ·AtRabD2b的表达与功能的关系第77-78页
   ·AtRabD基因之间存在功能冗余第78-79页
   ·AtRabD2b可能参与的生理过程第79-80页
   ·AtRabD基因调节的细胞死亡过程第80-81页
   ·异戊二烯化修饰对AtRabD2b功能的影响第81-83页
参考文献第83-98页
致谢第98-99页
附录第99页

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