| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 插图和附表清单 | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-26页 |
| 第一章 粪肠球菌概述 | 第16-26页 |
| ·粪肠球菌分类 | 第16页 |
| ·粪肠球菌形态及特征 | 第16-17页 |
| ·抵抗力及对药物敏感性 | 第17页 |
| ·诊断特征及致病性 | 第17-18页 |
| ·禽类感染粪肠球菌研究进展 | 第18-19页 |
| ·粪肠球菌鉴定方法研究进展 | 第19-20页 |
| ·粪肠球菌毒力岛研究进展 | 第20-23页 |
| ·粪肠球菌溶血素研究进展 | 第23-26页 |
| 第二篇 研究内容 | 第26-73页 |
| 第二章 致鹅败血症粪肠球菌的分离鉴定 | 第26-49页 |
| 1 材料和方法 | 第26-36页 |
| ·试验材料 | 第26-27页 |
| ·病料采集 | 第26页 |
| ·试验菌株 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·分子生物学试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-36页 |
| ·表型特征鉴定 | 第28-29页 |
| ·病原菌的分离筛选 | 第28页 |
| ·生物学特性观察 | 第28-29页 |
| ·16SrDNA鉴定 | 第29-35页 |
| ·分离菌总DNA提取(模板的制备) | 第29-30页 |
| ·16SrDNA的扩增 | 第30-31页 |
| ·16SrDNA重组质粒的构建 | 第31-34页 |
| ·16SrDNA序列测定及分析 | 第34-35页 |
| ·致病性试验 | 第35-36页 |
| ·药敏试验 | 第36页 |
| 2 试验结果 | 第36-46页 |
| ·表型特征鉴定结果 | 第36-41页 |
| ·病原菌的分离筛选 | 第36-37页 |
| ·生物学特性观察结果 | 第37-40页 |
| ·形态学观察结果 | 第37页 |
| ·属的区别、分群和种的鉴定结果 | 第37-40页 |
| ·毒力因子表型试验结果 | 第40-41页 |
| ·16SrDNA鉴定结果 | 第41-44页 |
| ·16SrDNA片段的扩增结果 | 第41页 |
| ·pMD18T-16SrDNA重组质粒PCR鉴定结果 | 第41页 |
| ·pMD18T-16SrDNA重组质粒双酶切鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·16SrDNA片段测序结果 | 第42-43页 |
| ·16SrDNA同源性分析结果 | 第43-44页 |
| ·致病力试验结果 | 第44-45页 |
| ·药敏试验结果 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| · | 第46-47页 |
| · | 第47-48页 |
| · | 第48页 |
| · | 第48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 第三章 致鹅败血症粪肠球菌溶血素Cy1A基因克隆及序列分析 | 第49-59页 |
| 1 材料和方法 | 第49-55页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·引物 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·试验方法 | 第50-55页 |
| ·模板的制备 | 第50页 |
| ·Cy1A基因扩增和序列测定 | 第50-51页 |
| ·PCR反应体系和条件 | 第50-51页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第51页 |
| ·Cy1A重组质粒的构建 | 第51-55页 |
| ·PCR产物与T载体的连接 | 第51-52页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·重组质粒的转化 | 第52页 |
| ·重组质粒的小量提取 | 第52页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第52-53页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列测定及分析 | 第53-55页 |
| 2 试验结果 | 第55-58页 |
| ·溶血素Cy1A基因扩增结果 | 第55页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·重组质粒PCR鉴定结果 | 第55页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列测定及分析结果 | 第56-58页 |
| ·溶血素Cy1A片段的纯化回收结果 | 第56页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列测定结果 | 第56-57页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列分析结果 | 第57-58页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列同源性分析结果 | 第57页 |
| ·溶血素Cy1A基因序列进化分析结果 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58页 |
| · | 第58页 |
| · | 第58页 |
| · | 第58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 第四章 致鹅败血症粪肠球菌溶血素Cy1A基因的原核表达 | 第59-73页 |
| 1 材料和方法 | 第59-67页 |
| ·试验材料 | 第59-60页 |
| ·菌株 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·引物 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·试验方法 | 第60-67页 |
| ·Cy1A基因扩增和序列测定 | 第60页 |
| ·Cy1A重组蛋白原核表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·Cy1A目的片段的获取 | 第61页 |
| ·表达载体的酶切 | 第61-62页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接 | 第62页 |
| ·Cy1A重组蛋白原核表达载体质粒的转化 | 第62-63页 |
| ·Cy1A重组质粒鉴定 | 第63页 |
| ·Cy1A重组质粒的诱导表达 | 第63-65页 |
| ·重组质粒的转化和阳性克隆菌的筛选 | 第63页 |
| ·IPTG最佳诱导时间的确定 | 第63-64页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第64页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE电泳分离 | 第64-65页 |
| ·Cy1A重组蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| ·蛋白样品的准备 | 第65-66页 |
| ·垫料的准备 | 第66页 |
| ·蛋白的层析纯化 | 第66页 |
| ·Western Blot分析 | 第66-67页 |
| 2 结果 | 第67-71页 |
| ·Cy1A序列测定及分析结果 | 第67-69页 |
| ·Cy1A序列测定结果 | 第67页 |
| ·Cy1A序列分析结果 | 第67-69页 |
| ·pET28a(+)-Cy1A重组质粒的PCR鉴定结果 | 第69-70页 |
| ·pET28a(+)-Cy1A重组质粒的酶切鉴定结果 | 第70页 |
| ·IPTG最佳诱导时间结果 | 第70页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度结果 | 第70-71页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第71页 |
| ·Westen Blot分析结果 | 第71页 |
| 3 讨论 | 第71-72页 |
| · | 第71页 |
| · | 第71-72页 |
| · | 第72页 |
| · | 第72页 |
| · | 第72页 |
| 4 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
