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海洋高温噬菌体非特异性核酸酶及溶原相关蛋白的性质研究

摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-28页
   ·核酸酶第13-16页
     ·非特异性核酸酶第13-16页
   ·噬菌体溶原性建立的遗传控制第16-26页
     ·λ噬菌体的溶原与裂解循环第16-17页
     ·λ噬菌体的基因组组成第17-18页
     ·λ噬菌体基因的转录与调控第18-19页
     ·λ噬菌体溶原性建立的遗传控制第19-22页
     ·CⅠ蛋白的性质第22-23页
     ·CⅡ蛋白的功能第23-24页
     ·特异位点重组第24-26页
   ·嗜热细菌噬菌体GBSV1 和GVE2 的基本特征第26-27页
   ·本论文研究目的及意义第27-28页
2 材料与方法第28-56页
   ·材料第28-38页
     ·样品第28页
     ·菌株和质粒第28-29页
     ·试剂盒第29页
     ·酶类及其他试剂第29-30页
     ·主要仪器第30-31页
     ·培养基及主要溶液第31-37页
     ·引物合成第37-38页
     ·主要分析软件第38页
   ·基本方法第38-56页
     ·细菌染色体总DNA 的提取第38-39页
     ·PCR 反应系统包括第39页
     ·菌落PCR第39页
     ·从琼脂糖凝胶上回收DNA 片段第39-40页
     ·连接反应第40页
     ·化学感受态细胞的制备第40页
     ·化学转化第40-41页
     ·质粒少量制备第41页
     ·核酸内切酶酶切反应第41页
     ·SDS-PAGE 蛋白凝胶电泳、染色、脱色第41-42页
     ·重组质粒的小量表达检测第42页
     ·Glutathione Sepharose 4B 纯化重组蛋白第42-43页
     ·Ni 柱亲和层析纯化可溶蛋白第43页
     ·重组蛋白多克隆抗体的制备第43-44页
     ·抗血清的纯化第44页
     ·酶联免疫分析(ELISA)第44-45页
     ·Western 杂交第45-46页
     ·细菌总RNA 的提取第46页
     ·Northern blot第46-48页
     ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 酶学性质的测定第48-50页
     ·嗜热细菌噬菌体的分子生物学研究第50-51页
     ·ChIP(染色质免疫沉淀分析)第51-54页
     ·EMSA(electrophoretic mobility shift assay,凝胶迁移滞留试验)第54页
     ·Column Format Affinity Purification Using Immobilized Streptavidin第54-56页
3 结果与分析第56-86页
   ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 基因的克隆及其性质的研究第56-65页
     ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 基因的克隆与序列分析第56-58页
     ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 的重组表达和纯化第58-59页
     ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 的功能验证第59-60页
     ·非特异性核酸酶GBSV1-NSN 的酶学性质第60-65页
   ·深海嗜热细菌噬菌体GVE2 溶原相关蛋白的性质研究第65-86页
     ·噬菌体溶原维持蛋白CⅠ的结构分析第65-67页
     ·cⅠ基因的性质研究第67-76页
     ·cⅠ基因在嗜热细菌噬菌体GVE2 宿主体内的转录分析第76-77页
     ·CⅠ蛋白二聚体结构的体外及体内分析第77-79页
     ·CⅠ蛋白的肽酶性质第79-81页
     ·深海嗜热细菌噬菌体GVE2 的特异位点重组酶VP462 的性质研究第81-86页
4 讨论第86-89页
   ·GBSV1-NSN 核酸酶的性质研究第86-87页
   ·深海嗜热细菌噬菌体GVE2 溶原性质研究第87-89页
5 小结与展望第89-90页
   ·小结第89页
   ·展望第89-90页
参考文献第90-105页
附录第105-106页
致谢第106页

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