| 符号及缩略语等的说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-38页 |
| 第一章 禽流感及对禽流感病毒的防治 | 第12-28页 |
| 1 定义 | 第12页 |
| 2 禽流感的历史及流行新特点 | 第12-14页 |
| ·禽流感的历史 | 第12页 |
| ·禽流感的流行新特点 | 第12-14页 |
| 3 病原 | 第14-15页 |
| ·病原的分类和命名 | 第14页 |
| ·流感病毒的分类 | 第14页 |
| ·流感病毒的命名法则 | 第14页 |
| ·流感病毒的形态和结构 | 第14-15页 |
| ·流感病毒的化学组成 | 第15页 |
| 4 禽流感病毒的分子生物学特征 | 第15-20页 |
| ·禽流感病毒的基因组成 | 第15-16页 |
| ·禽流感病毒基因编码蛋白功能 | 第16-20页 |
| ·聚合酶蛋白 | 第16-17页 |
| ·血凝素 | 第17页 |
| ·核蛋白 | 第17-18页 |
| ·神经氨酸酶 | 第18-19页 |
| ·基质蛋白 | 第19页 |
| ·非结构蛋白 | 第19-20页 |
| 5 禽流感病毒的复制 | 第20-22页 |
| ·吸附、穿膜和蜕壳 | 第20页 |
| ·基因组的转录与复制 | 第20-21页 |
| ·病毒蛋白的合成 | 第21页 |
| ·病毒粒子的装配 | 第21页 |
| ·病毒的出芽和释放 | 第21-22页 |
| 6 禽流感病毒的遗传变异 | 第22页 |
| 7 禽流感病毒对理化因素的抵抗力 | 第22-23页 |
| 8 禽流感的致病机理 | 第23页 |
| 9 H9N2亚型禽流感 | 第23-24页 |
| ·H9N2 AIV的分子演化 | 第24页 |
| ·H9N2 AIV的受体特异性 | 第24页 |
| 10 禽流感的流行病学 | 第24-27页 |
| ·发病季节 | 第24-25页 |
| ·传染源 | 第25页 |
| ·传播方式 | 第25页 |
| ·宿主范围 | 第25页 |
| ·易感日龄 | 第25页 |
| ·易感季节 | 第25-26页 |
| ·传播媒介 | 第26页 |
| ·潜伏期 | 第26页 |
| ·发病率和死亡率 | 第26页 |
| ·临床症状 | 第26-27页 |
| 11 疫苗和药物预防禽流感 | 第27-28页 |
| 第二章 LV-RNAi法预防禽流感 | 第28-32页 |
| 1 LV载体的应用 | 第28-29页 |
| 2 LV-siRNA技术 | 第29-32页 |
| 第三章 转基因鸡的研究进展 | 第32-38页 |
| 1 转基因鸡的制备方法 | 第32-35页 |
| ·慢病毒载体法 | 第32-33页 |
| ·原始生殖细胞介导法 | 第33-34页 |
| ·精子载体法 | 第34-35页 |
| ·显微注射法 | 第35页 |
| 2 转基因鸡研究存在的问题 | 第35-36页 |
| 3 本实验的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二部分 试验研究 | 第38-63页 |
| 第四章 禽流感病毒核蛋白基因(NP)siRNA筛选体系的建立 | 第38-44页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·NP-eGFP融合基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·禽流感病毒的繁殖 | 第38-39页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR反应 | 第39页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第39-40页 |
| ·pL-EGFP双酶切及载体片段的回收 | 第40页 |
| ·目的基因DNA产物的连接与转化 | 第40页 |
| ·CEF细胞的转染和表达产物的荧光检测 | 第40-41页 |
| ·NP基因表达的RT-PCR检测 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·融合基因表达载体pL-NP-EGFP的构建 | 第41-42页 |
| ·pL-NP-EGFP融合基因在CEF中的表达 | 第42页 |
| ·CEF细胞中pL-NP-EGFP基因表达的RT-PCR检测 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 质粒介导的siRNA/shRNA高效抑制A型禽流感复制靶位点的筛选 | 第44-50页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·siRNA片段的设计 | 第45页 |
| ·单链寡核苷酸的退火 | 第45页 |
| ·干涉重组质粒的构建与鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒转化CEF | 第45-46页 |
| ·禽流感病毒感染与病毒滴度测定 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-48页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·CEF中EGFP表达的荧光检测 | 第46-47页 |
| ·pSUPER-siNP3转染CEF后AIV病毒TCID_(50)及HA效价的测定 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 胚下腔显微注射具有高效抑制性的shRNA慢病毒干涉载体转染鸡胚生产转基因鸡 | 第50-63页 |
| 1 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·试验材料 | 第50-51页 |
| ·种蛋来源 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·慢病毒转运载体质粒的构建 | 第51页 |
| ·慢病毒干涉载体质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·慢病毒转运载体质粒的鉴定 | 第52页 |
| ·慢病毒干涉载体的鉴定 | 第52页 |
| ·进一步检测慢病毒干涉载体对禽流感NP基因的抑制作用 | 第52页 |
| ·病毒辅助质粒的扩增鉴定 | 第52-53页 |
| ·293FT细胞的培养 | 第53页 |
| ·病毒的生产 | 第53-54页 |
| ·病毒滴度分析 | 第54页 |
| ·病毒鸡胚注射 | 第54页 |
| ·转基因个体PCR分析 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-61页 |
| ·病毒转运载体鉴定 | 第54-55页 |
| ·病毒干涉载体的扩增鉴定 | 第55-56页 |
| ·慢病毒干涉载体对AIV病毒的抑制 | 第56-57页 |
| ·病毒包装质粒的扩增鉴定 | 第57-58页 |
| ·病毒滴度分析 | 第58-59页 |
| ·病毒转染后细胞表型的变化 | 第59页 |
| ·病毒在不同细胞中的表达特征 | 第59-61页 |
| ·转基因个体PCR分析 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 附录 | 第72-78页 |
| 1 主要试剂的配置 | 第72-73页 |
| ·PBS溶液 | 第72页 |
| ·0.25%胰蛋白酶 | 第72页 |
| ·抗生素的配置 | 第72页 |
| ·293FT细胞培养液的配置 | 第72页 |
| ·LB培养基配置 | 第72-73页 |
| ·质粒快速提取法所需试剂 | 第73页 |
| ·DNA提取所所需试剂 | 第73页 |
| 2 主要附图 | 第73-78页 |
| ·三对RNA干涉片段的测序图 | 第73-74页 |
| ·主要质粒构建图 | 第74-78页 |
| ·干涉基本质粒的构建 | 第75-76页 |
| ·慢病毒转运载体的构建 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
