| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-43页 |
| ·囊泡转运和细胞分泌 | 第12-34页 |
| ·细胞分泌过程与调控 | 第13-16页 |
| ·细胞分泌相关调控蛋白 | 第16-21页 |
| ·Munc13 蛋白功能与结构 | 第21-28页 |
| ·Exocyst 多元复合物功能与结构 | 第28-34页 |
| ·囊泡转运和膜蛋白的转运 | 第34-43页 |
| ·葡萄糖转运蛋白4 | 第35-38页 |
| ·GABA 信号通路途径 | 第38-43页 |
| 2 实验原理和研究技术 | 第43-55页 |
| ·蛋白质纯化方法 | 第43-45页 |
| ·亲和层析 | 第43-44页 |
| ·离子交换层析 | 第44-45页 |
| ·分子筛层析 | 第45页 |
| ·包涵体变性与复性 | 第45-47页 |
| ·包涵体形成机制研究 | 第46页 |
| ·包涵体蛋白复性机制研究 | 第46-47页 |
| ·分析超速离心 | 第47-49页 |
| ·分析性超速离心的工作原理 | 第47页 |
| ·分析性超速离心的应用 | 第47-49页 |
| ·圆二色光谱 | 第49-50页 |
| ·动态光散射 | 第50-52页 |
| ·动态光散射仪的工作原理 | 第50-51页 |
| ·动态光散射技术的应用 | 第51-52页 |
| ·蛋白质结晶学实验 | 第52-55页 |
| ·生物大分子的结晶过程 | 第52-53页 |
| ·生物大分子结晶的影响因素 | 第53-54页 |
| ·生物大分子的结晶方法 | 第54-55页 |
| 3 MUNC13-1 的表达纯化与特性研究 | 第55-79页 |
| ·实验材料与方法 | 第56-58页 |
| ·Munc13-1 的缺失突变体的基因扩增和克隆 | 第56-57页 |
| ·Munc13-1 的缺失突变体的表达与纯化 | 第57页 |
| ·分析超速离心实验 | 第57页 |
| ·CD 光谱实验 | 第57-58页 |
| ·动态光散射实验 | 第58页 |
| ·Munc13-1 的缺失突变体蛋白的结晶学实验 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-76页 |
| ·Munc13-1 的各缺失突变体的设计原则 | 第58-60页 |
| ·Munc13-1 功能结构域的表达纯化与性质研究 | 第60-69页 |
| ·Munc13-1 其它结构域的表达纯化与性质研究 | 第69-72页 |
| ·Munc13-1 蛋白的结晶学实验 | 第72-74页 |
| ·Munc13-1 结构域的同源建模分析 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| 4 EXOCYST 复合物亚基蛋白的表达与纯化研究 | 第79-86页 |
| ·实验材料与方法 | 第79-81页 |
| ·Sec10 基因扩增与克隆 | 第79-80页 |
| ·Sec10 全长蛋白以及突变体的表达与优化 | 第80-81页 |
| ·实验结果与讨论 | 第81-85页 |
| ·Sec10 氨基酸及蛋白二级结构信息 | 第81-82页 |
| ·Sec10 蛋白的纯化与性质研究 | 第82-84页 |
| ·Sec10 蛋白的电镜分析及结晶 | 第84-85页 |
| ·讨论与展望 | 第85-86页 |
| 5 GABAB 受体蛋白的表达与纯化研究 | 第86-96页 |
| ·实验材料与方法 | 第86-88页 |
| ·GABA_(B1)R 和GABA_(B2)R 胞外片断VFT 的基因扩增与克隆 | 第86-87页 |
| ·GABA_(B1)R 和GABA_(B2)R 胞外片断的表达 | 第87页 |
| ·GABA_(B1)R-VFT 包涵体变性复性实验 | 第87-88页 |
| ·实验结果与讨论 | 第88-96页 |
| ·GABA_(B1)R 和 GABA_(B2)R 胞外区结构域及模型 | 第88-90页 |
| ·GABA_(B1)R-VFT 的变性复性实验结果 | 第90-92页 |
| ·GABA_(B2)R-VFT 的表达情况 | 第92-93页 |
| ·本章小结 | 第93-95页 |
| ·展望 | 第95-96页 |
| 6 葡萄糖转运蛋白GLUT4 的组织提取与初步纯化 | 第96-105页 |
| ·实验材料与方法 | 第96-98页 |
| ·兔骨骼肌与猪脂肪的选取 | 第96-97页 |
| ·组织匀浆和破碎 | 第97页 |
| ·骨骼肌组织的差速离心分离 | 第97页 |
| ·脂肪组织的差速离心分离 | 第97-98页 |
| ·Western Blot 验证 | 第98页 |
| ·硫酸铵沉淀法纯化GLUT4 | 第98页 |
| ·实验结果 | 第98-104页 |
| ·GLUT4 的拓扑结构及组织定位 | 第98-99页 |
| ·兔骨骼肌GLUT4 的电泳分析和Western 检测 | 第99-101页 |
| ·猪脂肪GLUT4 的差速分离结果 | 第101-102页 |
| ·猪脂肪GLUT4 硫酸铵沉淀结果 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-117页 |
| 附录1 在攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第117-118页 |
| 附录2 主要符号和缩略词表 | 第118页 |
