| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-14页 |
| ·乳糖酶的应用及研究进展 | 第8-10页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第10-12页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第12页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第12-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-28页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·酶和生化试剂 | 第14页 |
| ·仪器 | 第14页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第14-16页 |
| ·PCR引物 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-28页 |
| ·乳糖酶基因的克隆 | 第16-21页 |
| ·乳糖酶基因的表达 | 第21-24页 |
| ·酶活性的测定和标准曲线的绘制 | 第24页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第24-25页 |
| ·乳糖酶的纯化 | 第25-26页 |
| ·表达乳糖酶的酶学性质研究 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-43页 |
| ·乳糖酶基因的克隆与鉴定 | 第28-32页 |
| ·乳糖酶基因DNA的获得 | 第28页 |
| ·乳糖酶cDNA克隆与鉴定 | 第28-30页 |
| ·乳糖酶基因测序结果及序列分析 | 第30-32页 |
| ·乳糖酶基因同源性的比较 | 第32页 |
| ·乳糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第32-43页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建与鉴定 | 第32-34页 |
| ·重组质粒pPIC9K-lac转化Pichia pastoris GS115及酵母转化子的筛选 | 第34-35页 |
| ·筛选高效表达乳糖酶的转化子 | 第35-36页 |
| ·重组酵母LAC-47的摇瓶诱导表达 | 第36页 |
| ·乳糖酶的纯化 | 第36-39页 |
| ·表达乳糖酶的酶学性质 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| ·黑曲霉乳糖酶基因的克隆 | 第43页 |
| ·乳糖酶的异源表达 | 第43-46页 |
| ·来源于黑曲霉DL116的乳糖酶和重组乳糖酶的酶学性质比较 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-60页 |