| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第12-33页 |
| 1 水稻转基因在育种中的应用 | 第12-21页 |
| ·抗病害育种 | 第12-13页 |
| ·抗细菌病害基因工程 | 第12页 |
| ·抗真菌病害基因工程 | 第12页 |
| ·抗病毒病害基因工程 | 第12-13页 |
| ·抗虫害育种 | 第13-14页 |
| ·苏云金杆菌杀虫结晶蛋白基因 | 第13页 |
| ·蛋白酶抑制剂基因 | 第13-14页 |
| ·植物凝集素基因 | 第14页 |
| ·淀粉酶抑制剂基因 | 第14页 |
| ·抗逆境育种 | 第14-15页 |
| ·品质育种 | 第15页 |
| ·抗除草剂育种 | 第15-21页 |
| ·抗EPSPS抑制剂基因及其在水稻上的应用 | 第16-17页 |
| ·抗ALS抑制剂基因及其应用 | 第17-18页 |
| ·乙酰CoA转移酶基因及其应用 | 第18-20页 |
| ·阿特拉津氯水解酶基因及其在水稻上的应用 | 第20页 |
| ·细胞色素P450基因及其在水稻上的应用 | 第20-21页 |
| ·原卟啉原氧化酶基因及其在水稻上的应用 | 第21页 |
| ·创造新的不育系、保持系和恢复系 | 第21页 |
| ·植物生物反应器 | 第21页 |
| 2 水稻转基因的主要方法及原理 | 第21-26页 |
| ·直接转化法 | 第21-24页 |
| ·基因枪法 | 第22页 |
| ·PEG诱导法 | 第22-23页 |
| ·电击(激)法 | 第23页 |
| ·花粉管通道法 | 第23-24页 |
| ·脂质体转化法 | 第24页 |
| ·激光微束介导法 | 第24页 |
| ·低能离子束介导法 | 第24页 |
| ·间接转化法 | 第24-26页 |
| ·根癌农杆菌介导转化法 | 第25-26页 |
| ·其它间接转化方法 | 第26页 |
| 3.水稻基因工程面临的主要问题和对策 | 第26-28页 |
| ·转化率低 | 第26页 |
| ·转基因沉默 | 第26-27页 |
| ·外源基因的低效表达 | 第27-28页 |
| 4.转基因的安全性 | 第28-29页 |
| ·转基因植物的食品安全性 | 第28页 |
| ·转基因植物的环境安全性 | 第28-29页 |
| 5 抗除草剂转基因水稻的应用前景 | 第29-31页 |
| ·作为水稻遗传转化的标记基因 | 第29-30页 |
| ·培育具有自主知识产权的抗除草剂水稻品种 | 第30页 |
| ·解决杂交水稻制种中杂种纯度问题 | 第30-31页 |
| ·简化杂交制种程序,降低杂交种成本 | 第31页 |
| 6.论文立题思想 | 第31-33页 |
| Ⅱ 材料和方法 | 第33-43页 |
| 1 实验材料 | 第33-35页 |
| ·水稻材料 | 第33页 |
| ·基因,质粒和菌株 | 第33页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第33-34页 |
| ·适用于水稻的培养基 | 第34页 |
| ·质粒DNA提取液: | 第34-35页 |
| ·植物基因组DNA提取用试剂 | 第35页 |
| ·电泳中用到的溶液 | 第35页 |
| 2.实验方法 | 第35-43页 |
| ·载体构建 | 第35-39页 |
| ·质粒的少量提取与鉴定(碱裂解法) | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化(电击法) | 第36-37页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化(热激法) | 第37页 |
| ·限制性内切酶典型的酶切反应: | 第37-38页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳的DNA片段的回收 | 第38页 |
| ·T4连接酶典型连接反应 | 第38页 |
| ·去磷酸化反应 | 第38-39页 |
| ·PCR产物克隆 | 第39页 |
| ·pCAMBIA1301-aroA质粒载体构建方案 | 第39页 |
| ·受体材料的准备 | 第39-40页 |
| ·愈伤组织的诱导和继代 | 第40页 |
| ·筛选压的确定 | 第40页 |
| ·农杆菌介导水稻愈伤组织的转化 | 第40-41页 |
| ·菌液准备 | 第40页 |
| ·转化 | 第40-41页 |
| ·洗菌与选择 | 第41页 |
| ·分化与生根 | 第41页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第41-42页 |
| ·植物DNA提取方法 | 第41-42页 |
| ·转基因水稻植株中aroA基因的PCR检测 | 第42页 |
| ·转基因植株的田间除草剂抗性检测 | 第42-43页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第43-49页 |
| 1 载体构建 | 第43-45页 |
| ·pCAMBIA1301-aroA质粒载体构建 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的筛选及插入方向鉴定 | 第44页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·质粒PCR验证 | 第45页 |
| ·测序鉴定 | 第45页 |
| 2 受体材料的获得 | 第45-47页 |
| ·不同外植体愈伤组织的诱导效果 | 第45-46页 |
| ·筛选压的确定 | 第46-47页 |
| 3 转基因植株的获得 | 第47页 |
| ·除草荆草甘膦抗性愈伤组织的筛选 | 第47页 |
| ·转基因水稻植株的再生 | 第47页 |
| 4.转基因植株的分子鉴定 | 第47-48页 |
| 5.转基因植株的田间除草剂抗性鉴定 | 第48-49页 |
| Ⅳ 讨论 | 第49-53页 |
| 1 水稻遗传转化中草甘膦筛选浓度的确定 | 第49页 |
| 2 受体材料的选择 | 第49-50页 |
| 3 愈伤组织的褐化问题 | 第50-51页 |
| 4 继代次数对分化率的影响 | 第51页 |
| 5 aroA基因作为水稻转化的筛选基因的意义 | 第51-52页 |
| 6 后续研究设想 | 第52-53页 |
| Ⅴ 附图 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63页 |