| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-46页 |
| 1 大麦胚乳贮藏蛋白的研究概况 | 第14-23页 |
| ·大麦胚乳贮藏蛋白的组成及特性 | 第15-18页 |
| ·大麦醇溶蛋白基因定位及遗传 | 第18-19页 |
| ·大麦醇溶蛋白多态性的应用 | 第19-20页 |
| ·大麦籽粒发育中醇溶蛋白的积累 | 第20页 |
| ·大麦高赖氨酸突变体及其与醇溶蛋白的关系 | 第20-21页 |
| ·大麦B组醇溶蛋白基因的克隆及分子特征 | 第21-23页 |
| ·大麦B组醇溶蛋白基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·大麦B组醇溶蛋白基因的分子特征 | 第22-23页 |
| 2 植物基因启动子的研究 | 第23-39页 |
| ·植物启动子的类型 | 第23-25页 |
| ·组成型启动子 | 第24页 |
| ·组织特异型启动子 | 第24页 |
| ·诱导型启动子 | 第24-25页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第25-33页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第25页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第25-33页 |
| ·启动子研究的方法 | 第33-36页 |
| ·启动子活性及顺式作用元件的鉴定 | 第33-35页 |
| ·实验测定方法 | 第33-34页 |
| ·计算机预测方法 | 第34-35页 |
| ·反式作用因子的鉴定 | 第35-36页 |
| ·禾谷类种子贮藏蛋白基因启动子的研究概况 | 第36-39页 |
| ·禾谷类贮藏蛋白基因的主要调控元件 | 第36-37页 |
| ·醇溶蛋白基因启动子 | 第37页 |
| ·谷蛋白基因启动子 | 第37-38页 |
| ·燕麦贮藏蛋白基因启动子 | 第38-39页 |
| ·种子贮藏蛋白基因启动子在植物基因工程中的应用 | 第39页 |
| 3 实时荧光定量PCR技术的发展和应用 | 第39-45页 |
| ·背景 | 第39-40页 |
| ·常用荧光标记方法 | 第40-43页 |
| ·荧光染料法 | 第40-41页 |
| ·荧光探针法 | 第41-43页 |
| ·荧光检测方法的选择 | 第43页 |
| ·实时荧光定量PCR的定量原理 | 第43-44页 |
| ·实时荧光定量PCR的数据分析 | 第44-45页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第45-46页 |
| 第二章 青稞B组醇溶蛋白(B-hordein)基因的分子克隆及序列分析 | 第46-72页 |
| 1 引言 | 第46-47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-55页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·植物材料 | 第47-48页 |
| ·菌株、载体、引物、工具酶及其它试剂 | 第48页 |
| ·培养基和抗生素 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-55页 |
| ·青稞醇溶蛋白提取及SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·PCR引物设计 | 第51-52页 |
| ·PCR扩增体系和扩增程序 | 第52页 |
| ·PCR产物克隆及重组克隆的鉴定 | 第52-54页 |
| ·目的基因的测序及序列分析 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-72页 |
| ·青稞B组醇溶蛋白多态性分析 | 第55-56页 |
| ·青稞B组醇溶蛋白(B-hordein)基因的PCR扩增和克隆 | 第56页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第56-59页 |
| ·青稞B-hordein基因的序列分析 | 第59-72页 |
| ·青稞B-hordein基因的核苷酸序列分析 | 第59-63页 |
| ·青稞B-hordein基因推测的氨基酸序列分析 | 第63-65页 |
| ·青稞B-hordein基因推测氨基酸的重复序列分析 | 第65页 |
| ·青稞B-hordein基因系统进化分析 | 第65-68页 |
| ·青稞B-hordein基因推测氨基酸的C-末端序列分析 | 第68页 |
| ·推测的假基因(Pseudogenes) | 第68-72页 |
| 第三章 青稞B组醇溶蛋白基因启动子序列的克隆及功能元件分析 | 第72-86页 |
| 1 引言 | 第72-73页 |
| 2 材料与方法 | 第73-76页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·青稞基因组DNA的提取 | 第74页 |
| ·青稞B-hordein基因5’上游调控区的PCR引物设计 | 第74页 |
| ·青稞B-hordein基因5’上游调控区的PCR扩增 | 第74-76页 |
| ·PCR产物回收和克隆及重组子的筛选 | 第76页 |
| ·DNA序列测定及分析 | 第76页 |
| 3 结果与分析 | 第76-86页 |
| ·青稞B-hordein基因启动子序列的PCR扩增及克隆 | 第76-78页 |
| ·SON-PCR扩增产物分析 | 第76-78页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物分析 | 第78页 |
| ·青稞B-hordein基因启动子序列的功能元件分析 | 第78-82页 |
| ·青稞B-hordein基因编码区上游-200～－600bp之间的序列多态性 | 第82-85页 |
| ·青稞B-hordein基因启动子序列的系统进化分析 | 第85-86页 |
| 第四章 青稞B-hordein基因在大肠杆菌中的表达 | 第86-97页 |
| 1 引言 | 第86页 |
| 2 材料与方法 | 第86-90页 |
| ·材料 | 第86-87页 |
| ·试剂及配方 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-90页 |
| ·B-hordein基因表达的引物设计及PCR扩增 | 第87-88页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·获得含重组表达载体的表达菌株 | 第89页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第89-90页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第90页 |
| 3 结果与分析 | 第90-97页 |
| ·B-hordein基因编码区的扩增 | 第90-91页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第91-93页 |
| ·B-hordein基因体外表达的SDS-PAGE检测 | 第93-97页 |
| 第五章 青稞B-hordein基因的实时荧光定量PCR分析 | 第97-115页 |
| 1 引言 | 第97-98页 |
| 2 材料、仪器设备与方法 | 第98-102页 |
| ·材料 | 第98-99页 |
| ·植物材料 | 第98页 |
| ·化学试剂 | 第98-99页 |
| ·主要仪器设备 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-102页 |
| ·取材 | 第99页 |
| ·青稞种子总RNA提取 | 第99页 |
| ·RNA的纯化及浓度和纯度鉴定 | 第99-100页 |
| ·cDNA合成 | 第100页 |
| ·定量PCR基因特异引物的设计 | 第100-101页 |
| ·标准曲线的制作 | 第101页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增 | 第101-102页 |
| 3 结果与分析 | 第102-115页 |
| ·标准品的产生及重组克隆的鉴定 | 第102-103页 |
| ·PCR扩增特异性条件的摸索 | 第103-104页 |
| ·标准曲线的线性关系 | 第104-105页 |
| ·标准曲线的重复性和特异性 | 第105-107页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增分析 | 第107-114页 |
| ·青稞B-hordein基因转录水平的定量结果 | 第114-115页 |
| 第六章 讨论和结论 | 第115-128页 |
| 1 讨论 | 第115-125页 |
| ·青稞B-hordein基因的克隆和分子特征 | 第115-118页 |
| ·青稞B-hordein基因的结构特征 | 第115-116页 |
| ·推测的假基因 | 第116-117页 |
| ·青稞B-hordein基因的C-末端序列 | 第117-118页 |
| ·青稞B-hordein基因在作物品质育种中的潜在应用价值 | 第118页 |
| ·青稞B-hordein基因启动子的克隆 | 第118-121页 |
| ·青稞B-hordein基因在异质系统中的表达 | 第121-122页 |
| ·青稞B-hordein基因的实时荧光定量PCR分析 | 第122-125页 |
| ·荧光定量B-hordein基因表达水平的误差校正 | 第122-123页 |
| ·荧光染料定量PCR的特点 | 第123-124页 |
| ·标准曲线的评价及线性范围 | 第124页 |
| ·青稞B-hordein基因表达调控分析 | 第124-125页 |
| 2 结论 | 第125-128页 |
| ·B-hordein基因的多态性 | 第125页 |
| ·种子贮藏蛋白基因启动子 | 第125-126页 |
| ·B-hordein基因相对表达水平的荧光定量 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 在读博士期间发表的论文 | 第137页 |
