| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 英文缩略语(Abbreviation) | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-22页 |
| 第一部分 GDM生物合成基因簇的克隆与生物信息学分析 | 第22-56页 |
| 一.实验材料与方法 | 第22-29页 |
| 1.实验材料 | 第22-25页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第22页 |
| ·菌种 | 第22页 |
| ·载体 | 第22页 |
| ·特殊试剂与酶 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·常用缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.实验方法 | 第25-29页 |
| ·E.coli质粒DNA小量提取 | 第25页 |
| ·限制酶切反应 | 第25-26页 |
| ·DNA电泳及片段回收 | 第26页 |
| ·去磷酸化反应 | 第26页 |
| ·DNA连接反应 | 第26页 |
| ·链霉菌总DNA提取方法 | 第26-27页 |
| ·少量快速提取链霉菌总DNA | 第27页 |
| ·PCR反应 | 第27页 |
| ·从基因文库筛选阳性克隆的菌落PCR方法 | 第27-28页 |
| ·Southern杂交 | 第28-29页 |
| 二.结果与讨论 | 第29-56页 |
| 1.氨甲酰基转移酶(carbamoyltransferase,CT)基因的克隆 | 第29-31页 |
| 2.Streptomyces hygroscopicus 17997中与gdmN(CT)基因连锁的GDM生物合成基因簇的获得 | 第31-56页 |
| ·CT基因阳性柯斯质粒克隆的获得 | 第31-32页 |
| ·CT基因在阳性克隆中的定位 | 第32-33页 |
| ·CT-4的亚克隆序列测定与生物信息学分析 | 第33-55页 |
| ·Streptomyces hygroscopicus 17997中GDM部分生物合成基因簇连锁图 | 第55-56页 |
| 第二部分 GDM重要生物合成基因的阻断与阻断变株产生相应次级代谢产物的鉴定 | 第56-84页 |
| 一.实验材料与方法 | 第56-61页 |
| 1.实验材料 | 第56-59页 |
| ·菌种 | 第56页 |
| ·载体和基因 | 第56页 |
| ·抗生素 | 第56页 |
| ·化学试剂 | 第56页 |
| ·硅胶柱和凝胶柱 | 第56-57页 |
| ·实验仪器 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-59页 |
| 2.实验方法 | 第59-61页 |
| ·大肠杆菌ET12567／pUZ8002与吸水链霉菌17997接合转移的方法 | 第59页 |
| ·发酵培养 | 第59-60页 |
| ·发酵培养物的提取和组分鉴定 | 第60-61页 |
| ·色谱分析方法 | 第61页 |
| 二.结果与讨论 | 第61-84页 |
| 1.吸水链霉菌17997基因导入方法和载体的选择 | 第61-62页 |
| 2.AHBA生物合成基因的阻断及其鉴定 | 第62-68页 |
| ·gdnA-O-P和shnS-O-P基因阻断载体的构建 | 第62-64页 |
| ·基因阻断变株GA和SA的筛选和鉴定 | 第64-68页 |
| 3.PKS、gdmN和gdmM基因阻断和发酵产物的鉴定 | 第68-78页 |
| ·PKS、gdmN和gdmM基因阻断载体的构建 | 第68-71页 |
| ·PKS、gdmN和gdmM基因阻断变株的筛选和鉴定 | 第71-75页 |
| ·gdmN基因阻断变株发酵产物的分离鉴定和变株回复实验 | 第75-78页 |
| 4.gdmN基因阻断株(CT-1)产生的两种主产物的结构解析 | 第78-84页 |
| ·CT-1-7的化学结构鉴定 | 第78-79页 |
| ·gdmN基因阻断株(CT-1)发酵产物的监测 | 第79-80页 |
| ·GDM、CT-1-7和CT-1-1的质谱数据比较 | 第80-81页 |
| ·CT-1-1产物的化学结构鉴定 | 第81-84页 |
| 第三部分 GDM生物合成调节基因的研究 | 第84-99页 |
| 一.实验材料与方法 | 第84-88页 |
| 1.实验材料 | 第84-85页 |
| ·菌种 | 第84页 |
| ·载体 | 第84页 |
| ·特殊试剂 | 第84页 |
| ·实验仪器 | 第84页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第84-85页 |
| 2.实验方法 | 第85-88页 |
| ·链霉菌Streptomyces lividans TK24原生质体的制备、再生及DNA转化 | 第85-86页 |
| ·RNA提取实验器具的处理与准备： | 第86页 |
| ·链霉菌总RNA的提取(TRIzol法) | 第86-87页 |
| ·总RNA定量 | 第87页 |
| ·总RNA的纯化 | 第87页 |
| ·两步法RT-PCR | 第87-88页 |
| 二.结果与讨论 | 第88-99页 |
| 1.gdmRⅠ和gdmRⅡ基因阻断实验 | 第88-92页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ基因阻断载体的构建 | 第88-90页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ基因阻断株的筛选 | 第90页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断株的PCR鉴定 | 第90-91页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断株发酵抗菌活性的测定 | 第91页 |
| ·gdmRⅠ和gdmRⅡ的基因阻断株发酵产物的HPLC鉴定 | 第91-92页 |
| 2.gdmRⅠ和gdmRⅡ调节基因在转录水平上的研究 | 第92-97页 |
| ·吸水链霉菌17997生理代谢的研究 | 第92-93页 |
| ·RT-PCR检测在原株中gdmRⅠ和gdmRⅡ的转录活性 | 第93-94页 |
| ·RT-PCR检测GDM主要生物合成基因在原株中的转录活性 | 第94-96页 |
| ·RT-PCR检测GDM主要生物合成基因在调节基因阻断株中的转录活性 | 第96-97页 |
| 3.转录调节基因gdmRⅠ、gdmRⅡ启动子区的初步定位 | 第97-99页 |
| 结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-104页 |
| 文献综述 | 第104-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 附录 | 第118-126页 |
| 博士在读期间发表的学术论文 | 第126页 |
