| 第1章 文献综述 | 第1-46页 |
| ·大麦黄矮病毒研究进展 | 第16-23页 |
| ·生物学特征 | 第16-19页 |
| ·寄主范围和症状 | 第16页 |
| ·株系及分布 | 第16-18页 |
| ·病毒传播特点 | 第18-19页 |
| ·病毒颗粒结构 | 第19页 |
| ·分子生物学特征 | 第19-23页 |
| ·基因组结构 | 第19-20页 |
| ·基因产物的功能 | 第20-23页 |
| ·抗病毒转基因植物研究进展 | 第23-30页 |
| ·病毒基因介导的抗病性 | 第23-27页 |
| ·外壳蛋白(Coat protein，CP)基因 | 第23-25页 |
| ·复制酶基因(Replicase gene) | 第25-26页 |
| ·运动蛋白(Movement Protein，MP)基因 | 第26页 |
| ·卫星RNA(Satellite RNA) | 第26-27页 |
| ·RNA干扰介导的抗性 | 第27页 |
| ·非病毒来源的基因介导的抗性 | 第27-30页 |
| ·植物抗病基因 | 第27-28页 |
| ·核糖体失活蛋白(Ribosome inactivating proteins，RIPs) | 第28页 |
| ·核酶(Ribozyme) | 第28-29页 |
| ·抗体(Antibodies) | 第29页 |
| ·dsRNA分解酶介导的抗性 | 第29-30页 |
| ·RNA干扰与植物抗病毒 | 第30-46页 |
| ·RNAi过程 | 第30-38页 |
| ·RNAi的起始 | 第30-31页 |
| ·RISC的装配 | 第31-35页 |
| ·RNAi作用特点 | 第35-38页 |
| ·病毒编码的RNA沉默抑制蛋白 | 第38-43页 |
| ·p19蛋白 | 第38-40页 |
| ·HC-Pro | 第40-41页 |
| ·C2蛋白 | 第41页 |
| ·2b蛋白 | 第41页 |
| ·NS蛋白 | 第41-42页 |
| ·其他抑制蛋白 | 第42-43页 |
| ·RNAi技术在植物抗病毒基因工程中的应用 | 第43-46页 |
| 第2章 材料与方法 | 第46-60页 |
| ·DNA克隆及测序 | 第46-50页 |
| ·试剂及仪器 | 第46页 |
| ·菌株和载体 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第46-47页 |
| ·质粒提取 | 第47-48页 |
| ·质粒的小量制备 | 第47-48页 |
| ·质粒的大量制备 | 第48页 |
| ·质粒纯化 | 第48页 |
| ·酶切、目的片断回收及连接转化 | 第48-49页 |
| ·酶切及目的片断回收 | 第48-49页 |
| ·连接及转化 | 第49页 |
| ·重组质粒的快速筛选 | 第49-50页 |
| ·序列测定 | 第50页 |
| ·遗传转化 | 第50-55页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第50-53页 |
| ·菌株及载体 | 第50-51页 |
| ·农杆菌用培养基 | 第51页 |
| ·农杆菌感受态制备及转化 | 第51-52页 |
| ·植物组培用培养基 | 第52-53页 |
| ·基因枪法介导的转化 | 第53-55页 |
| ·真核表达载体 | 第53-54页 |
| ·轰击操作 | 第54-55页 |
| ·花粉管通道法介导的转化 | 第55页 |
| ·再生植株的检测 | 第55-60页 |
| ·小麦基因组DNA的提取 | 第55页 |
| ·植物组织总RNA提取 | 第55-56页 |
| ·PCR检测 | 第56页 |
| ·直接用叶片进行的PCR快速检测 | 第56页 |
| ·以提取的小麦基因组DNA为模板的PCR检测 | 第56页 |
| ·Dot Blot | 第56-57页 |
| ·Southern Blot | 第57-58页 |
| ·探针标记 | 第57页 |
| ·膜制备 | 第57页 |
| ·杂交 | 第57-58页 |
| ·检测 | 第58页 |
| ·nptII ELISA检测 | 第58-60页 |
| 第3章 病毒来源发夹RNA介导抗BYDV转基因小麦研究 | 第60-82页 |
| ·材料与方法 | 第60-64页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·用于转化的真核表达载体的制备 | 第62页 |
| ·小麦幼胚组织培养 | 第62页 |
| ·小麦品种及组织材料 | 第62页 |
| ·幼胚的获取及培养 | 第62页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第62-63页 |
| ·菌液的准备 | 第62-63页 |
| ·浸染转化 | 第63页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选和转基因苗的获得 | 第63页 |
| ·基因枪法进行的遗传转化 | 第63页 |
| ·花粉管通道法介导的遗传转化 | 第63页 |
| ·转基因再生小麦植株的分子生物学检测 | 第63页 |
| ·抗性检测方法 | 第63-64页 |
| ·温室病毒抗性检测方法 | 第63-64页 |
| ·大田病毒抗性检测方法 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-78页 |
| ·农杆菌介导对小麦的遗传转化 | 第64-72页 |
| ·hpRNA真核表达载体构建 | 第64-65页 |
| ·转化及再生植株的获得 | 第65-66页 |
| ·T0代G418抗性植株的分子生物学检测 | 第66-69页 |
| ·再生植株的抗病性检测 | 第69-72页 |
| ·基因枪法对小麦的遗传转化 | 第72-77页 |
| ·hpRNA真核表达载体构建 | 第72页 |
| ·质粒的纯化 | 第72-74页 |
| ·T0代再生植株的分子生物学检测 | 第74-75页 |
| ·再生植株的抗病性检测 | 第75-77页 |
| ·花粉管通道法对小麦的遗传转化 | 第77-78页 |
| ·hpRNA真核表达载体构建 | 第77页 |
| ·转化及转化种子的获得 | 第77-78页 |
| ·T1代植株的抗病性筛选 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-82页 |
| ·小麦遗传转化的外植体选择 | 第79页 |
| ·小麦遗传转化方法 | 第79-80页 |
| ·hpRNA介导的抗性 | 第80-82页 |
| 第4章 pac1介导抗BYDV转基因小麦研究 | 第82-89页 |
| ·材料与方法 | 第82-83页 |
| ·载体 | 第82-83页 |
| ·农杆菌介导转化 | 第83页 |
| ·T0代再生植株的分子生物学检测 | 第83页 |
| ·病毒抗性检测方法 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-87页 |
| ·转基因再生植株的获得 | 第83页 |
| ·转基因再生植株的分子检测 | 第83-85页 |
| ·转基因再生植株的抗病性鉴定 | 第85-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第5章 正反向双启动子dsRNA双元表达载体构建 | 第89-93页 |
| ·材料与方法 | 第90-91页 |
| ·表达框架构建 | 第90页 |
| ·载体构建 | 第90-91页 |
| ·功能检测体系 | 第91页 |
| ·结果与分析 | 第91页 |
| ·表达框架的序列测定 | 第91页 |
| ·农杆菌瞬时转染转gfp烟草 | 第91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 第6章 结论与展望 | 第93-95页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| ·获得多株对BYDV表现不同程度抗性的转复合hpRNA小麦再生植株 | 第93页 |
| ·获得多株对BYDV表现不同程度抗性的转pac1基因小麦再生植株 | 第93页 |
| ·转基因植株对BYDV抗性的剂量效应 | 第93页 |
| ·正反向双启动子dsRNA双元表达载体构建 | 第93-94页 |
| ·展望 | 第94-95页 |
| ·转基因植株后代的抗性遗传分析 | 第94页 |
| ·BYDV-GPV的沉默抑制蛋白分析 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 个人简历 | 第113页 |
