| 目录 | 第1-7页 |
| 缩写 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| 一.氯代烟碱类杀虫剂——啶虫脒 | 第15-18页 |
| 二.啶虫脒代谢研究进展 | 第18-21页 |
| 三、生物转化技术 | 第21-27页 |
| 第二章 细菌转化AAP的研究 | 第27-76页 |
| 第一节 转化啶虫脒细菌菌种的筛选和鉴定 | 第27-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第27-30页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·菌种 | 第28页 |
| ·静息细胞的制备和转化 | 第28-29页 |
| ·HPLC和LC/MS分析 | 第29页 |
| ·细菌16S rDNA序列分析 | 第29-30页 |
| 2.结果 | 第30-34页 |
| ·转化AAP的细菌菌株 | 第30-32页 |
| ·LC/MS分析 | 第32-33页 |
| ·细菌16S rDNA序列分析 | 第33-34页 |
| 3.讨论 | 第34-36页 |
| 第二节 转化产物的分离、提纯和结构鉴定 | 第36-50页 |
| 一.发酵罐发酵、转化及产物提纯 | 第36-41页 |
| 1.材料和方法 | 第36-38页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·培养和转化方法 | 第36-37页 |
| ·HPLC分析 | 第37页 |
| ·转化产物提取与纯化 | 第37-38页 |
| 2.结果 | 第38-40页 |
| ·发酵和转化 | 第38页 |
| ·转化产物提取与纯化 | 第38-40页 |
| 3.讨论 | 第40-41页 |
| 二.转化产物的结构表征 | 第41-46页 |
| 1.材料与方法 | 第41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·MS分析 | 第41页 |
| ·紫外光谱分析 | 第41页 |
| ·核磁共振光谱分析 | 第41页 |
| 2.结果 | 第41-46页 |
| ·MS分析 | 第41-42页 |
| ·紫外光谱分析 | 第42-46页 |
| 3.讨论 | 第46页 |
| 三.IM-2-1和AAP标准工作曲线的制定 | 第46-50页 |
| 1.材料与方法 | 第46-47页 |
| ·试剂与仪器 | 第46-47页 |
| ·色谱柱和流动相 | 第47页 |
| ·标准溶液配制 | 第47页 |
| 2.结果 | 第47-48页 |
| ·最佳波长选择 | 第47页 |
| ·标准校正曲线的线性回归方程 | 第47-48页 |
| 3.讨论 | 第48-50页 |
| 第三节 转化产物生物活性测定 | 第50-53页 |
| 1.材料与方法 | 第50-51页 |
| ·药剂 | 第50页 |
| ·试虫 | 第50页 |
| ·测试方法 | 第50-51页 |
| 2.结果 | 第51页 |
| 3.讨论 | 第51-53页 |
| 第四节 S.maltophilia对AAP脱甲基化作用研究 | 第53-61页 |
| 1.材料和方法 | 第53-54页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·试剂和仪器 | 第53页 |
| ·培养和转化方法 | 第53-54页 |
| ·生物量的测定 | 第54页 |
| ·HPLC分析 | 第54页 |
| 2.实验结果与讨论 | 第54-61页 |
| ·不同细胞生长时期对IM-2-1生成的影响 | 第54-55页 |
| ·不同蔗糖浓度对转化能力的影响 | 第55-56页 |
| ·静息细胞转化动力学分析 | 第56-57页 |
| ·不同底物浓度对转化能力的影响 | 第57页 |
| ·S.maltophilia CGMCC 1.1788生长细胞动力学分析 | 第57-58页 |
| ·不同PBO浓度对脱甲基化活性的影响 | 第58-59页 |
| ·不同诱导剂对转化能力的影响 | 第59-61页 |
| 第五节 S.maltophilia CGMCC 1.1788脱甲基化酶和羟基化酶基因的克隆 | 第61-76页 |
| 一.鸟枪法克隆 | 第61-73页 |
| 1.材料与方法 | 第61-67页 |
| ·主要仪器 | 第61-62页 |
| ·培养基和试剂 | 第62-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第63页 |
| ·菌体全基因组DNA的制备方法 | 第63页 |
| ·DNA浓度及纯度测定方法 | 第63-64页 |
| ·高拷贝质粒DNA的小量提取(碱变性法) | 第64页 |
| ·染色体DNA的部分酶切与酶切片段的回收 | 第64-65页 |
| ·脱磷酸化载体pUC18的制备 | 第65页 |
| ·电转化E.coli DH10B感受态细胞的制备方法 | 第65-66页 |
| ·酶连及酶连产物的电击转化 | 第66-67页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第67页 |
| 2.结果 | 第67-72页 |
| ·S.maltophilia全基因组DNA的获得 | 第67页 |
| ·S.maltophilia全基因组DNA浓度及纯度 | 第67页 |
| ·总DNA的Sau3A Ⅰ不完全酶切 | 第67-71页 |
| ·文库质量分析 | 第71-72页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第72页 |
| 3.讨论 | 第72-73页 |
| 二.PCR克隆 | 第73-76页 |
| 1.材料与方法 | 第73-74页 |
| ·主要仪器 | 第73-74页 |
| ·模板 | 第74页 |
| ·基因克隆 | 第74页 |
| ·PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第74页 |
| ·PCR产物测序 | 第74页 |
| 2.结果与讨论 | 第74-76页 |
| 第三章 真菌代谢AAP的研究 | 第76-101页 |
| 第一节 转化啶虫脒真菌菌种的筛选和鉴定 | 第76-89页 |
| 1.材料与方法 | 第76-80页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76-77页 |
| ·菌种 | 第77页 |
| ·霉菌和酵母的生长细胞转化 | 第77-78页 |
| ·HPLC分析 | 第78页 |
| ·保守序列分析 | 第78-80页 |
| ·真菌的形态分析 | 第80页 |
| 2.结果 | 第80-88页 |
| ·可转化AAP的真菌菌株 | 第80-85页 |
| ·R1、W1和X1的菌种鉴定 | 第85-88页 |
| 3.讨论 | 第88-89页 |
| 第二节 AAP的微生物降解 | 第89-92页 |
| 1.材料与方法 | 第89-90页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第89页 |
| ·培养基 | 第89页 |
| ·菌种 | 第89页 |
| ·AAP在唯一碳源培养基中的降解 | 第89-90页 |
| ·HPLC分析 | 第90页 |
| 2.结果 | 第90-91页 |
| ·AAP的降解曲线 | 第90页 |
| ·R.mucilaginosa R1降解AAP的指数回归曲线 | 第90-91页 |
| 3.讨论 | 第91-92页 |
| 第三节 根霉的AAP代谢途径分析 | 第92-101页 |
| 1.材料与方法 | 第92-93页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第92页 |
| ·培养基 | 第92页 |
| ·菌种 | 第92页 |
| ·霉菌的生长细胞转化 | 第92页 |
| ·HPLC和LC/MS分析 | 第92-93页 |
| 2.结果 | 第93-99页 |
| ·HPLC分析 | 第93页 |
| ·LC/MS分析 | 第93-98页 |
| ·AAP在Rhizopus sp.中可能的代谢途径 | 第98-99页 |
| 3.讨论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 附件 | 第109-118页 |
| 附件一:在读硕士期间主要科研情况 | 第109-110页 |
| 附件二:菌种鉴定 | 第110-115页 |
| 附件三:NI-25和IM-2-1对蚕豆蚜室内杀虫活性比较报告 | 第115-118页 |
| 附件四:PCR克隆结果 | 第118页 |
