| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 文献综述 | 第9-19页 |
| 1 微生物几丁质酶的研究研究历史及相关性质 | 第9-13页 |
| ·几丁质酶的研究历史 | 第9-10页 |
| ·产几丁质酶的微生物 | 第10-11页 |
| ·几丁质酶的特点和理化性质 | 第11-13页 |
| ·几丁质酶基因的结构 | 第13页 |
| 2 微生物几丁质酶的分子生物学研究进展 | 第13-16页 |
| 3 外源基因在原核生物中表达的研究进展 | 第16-19页 |
| ·原核生物基因表达的特点及其表达需要的条件 | 第16页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第16-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-35页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| 2 仪器与试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| 3 方法 | 第21-35页 |
| ·细菌基因组DNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·chiB 基因片段的PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·测序载体pUC-chiB 的构建 | 第24-28页 |
| ·表达载体pET-chiB 的构建 | 第28-30页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·外源基因编码蛋白SDS-PAGE 分析 | 第31-33页 |
| ·表达蛋白对真菌的抑制试验 | 第33页 |
| ·几丁质酶活力测定 | 第33-35页 |
| 结果与分析 | 第35-51页 |
| 1chiB 基因的分离与克隆 | 第35-38页 |
| ·引物设计 | 第35-37页 |
| ·chiB 基因片段的PCR 扩增 | 第37-38页 |
| 2 测序载体pUC-chiB 的构建 | 第38-44页 |
| ·PCR 扩增片段的纯化 | 第38-39页 |
| ·载体pUC18 的酶切、去磷酸化与纯化回收 | 第39页 |
| ·测序载体pUC-chiB 的物理筛选 | 第39页 |
| ·测序载体pUC-chiB 的酶切验证 | 第39-40页 |
| ·pUC-chiB 的测序结果与比对分析 | 第40-44页 |
| 3 表达载体pET-ChiB 的构建 | 第44-46页 |
| ·表达载体pET-chiB 的物理筛选 | 第44页 |
| ·表达载体pET-chiB 的酶切验证 | 第44-45页 |
| ·chiB 基因插入方向的正确性验证 | 第45-46页 |
| 4 chiB 基因的诱导表达及其蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第46-49页 |
| ·外源基因表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第46-47页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第47-49页 |
| 5 表达蛋白对真菌的抑制效果 | 第49页 |
| 6 几丁质酶活力测定 | 第49-51页 |
| ·NAG 标准曲线的绘制 | 第49-50页 |
| ·几丁质酶活力测定 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-68页 |
| 附件 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |