| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-30页 |
| ·研究的意义及思路 | 第10页 |
| ·cDNA文库克隆随机测序的原理 | 第10-11页 |
| ·生物信息学的应用 | 第11-20页 |
| ·表达序列标签(EST)的意义 | 第11-13页 |
| ·核酸序列、氨基酸序列、蛋白质结构和功能预测的分析 | 第13-20页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的简介 | 第20-27页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的分类与性质 | 第20-24页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的研究进展 | 第24-26页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的应用 | 第26-27页 |
| ·由EST到全长cDNA的基因克隆策略 | 第27页 |
| ·酵母菌表达系统的简介 | 第27-30页 |
| ·酵母表达系统的优缺点 | 第27-28页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第28-30页 |
| 第二章 实验设备及材料 | 第30-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-39页 |
| ·菌种及载体 | 第30页 |
| ·酶类 | 第30-31页 |
| ·试剂盒 | 第31页 |
| ·常用试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-36页 |
| ·试剂与母液配制 | 第36-39页 |
| 第三章 A.tabescens.(E-20)cDNA文库部分克隆的随机测序 | 第39-46页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·部分文库铺平板 | 第39-40页 |
| ·随机挑选150个克隆转换克隆的形式 | 第40-41页 |
| ·测序 | 第41页 |
| ·测序结果的初步分析 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·测序结果 | 第41-42页 |
| ·BLAST同源性分析结果 | 第42-46页 |
| 第四章 全长cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达 | 第46-86页 |
| ·AF全长cDNA的克隆和信息学分析 | 第46-52页 |
| ·菌E-20的培养 | 第46页 |
| ·总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·5’RACE | 第47-51页 |
| ·AF的生物信息学分 | 第51-52页 |
| ·毕赤酵母系统表达目的蛋白 | 第52-63页 |
| ·pHIL-S1-AF重组子在酵母中的表达 | 第53-59页 |
| ·带组胺酸标签的重组子pPIC9-AF在酵母中的表达 | 第59-61页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的酶学性质分析： | 第61-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-86页 |
| ·总RNA提取的结果 | 第63页 |
| ·5’RACE的结果 | 第63-67页 |
| ·AF的生物信息学分析 | 第67-76页 |
| ·重组子pHIL-S1-AF在GS115中的表达结果 | 第76-78页 |
| ·重组子pPIC9-AF在GS115中的表达结果 | 第78-80页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的酶学性质分析结果 | 第80-86页 |
| 第五章 讨论 | 第86-95页 |
| ·cDNA文库克隆随机测序 | 第86页 |
| ·阿拉伯糖苷酶全长cDNA的分析 | 第86-87页 |
| ·生物信息学分析 | 第87-90页 |
| ·序列比对分析(Blast) | 第88-89页 |
| ·AF的信息学分析 | 第89-90页 |
| ·影响目的蛋白在毕赤酵母中高效表达的因素 | 第90-93页 |
| ·外源基因在酵母中表达产物的分泌 | 第90-91页 |
| ·外源蛋白的酶解 | 第91-92页 |
| ·宿主菌及载体的选择 | 第92页 |
| ·密码子 | 第92-93页 |
| ·发酵条件的优化 | 第93页 |
| ·影响目的蛋白活性的因素 | 第93页 |
| ·阿拉伯糖苷酶的酶学性质分析 | 第93-95页 |
| 结论及展望 | 第95-96页 |
| 英文缩略词表 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
