| 中文摘要 | 第1-20页 |
| 英文摘要 | 第20-25页 |
| 第一部分 聚乙烯亚胺-DNA疫苗递释系统的设计和呼吸道免疫效果评价 | 第25-151页 |
| 前言 | 第25-31页 |
| 第一章 结核杆菌DNA疫苗pcDNA85btPA质粒的设计、构建及鉴定 | 第31-45页 |
| 1 材料和仪器 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-38页 |
| ·菌种的复苏与冻存 | 第32页 |
| ·感受态细菌的制备和质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的小量抽提 | 第33页 |
| ·DNA提取 | 第33页 |
| ·目的基因85b基因的分离和扩增 | 第33页 |
| ·重组pcDNA85b质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·tPA信号肽基因序列的扩增 | 第34页 |
| ·重组pcDNA85btPA的构建及鉴定 | 第34页 |
| ·pcDNA85btPA质粒的大量纯化 | 第34-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·结核杆菌抗原Ag85b基因的分离和扩增 | 第38页 |
| ·tPA信号肽基因序列的分离和扩增 | 第38-39页 |
| ·质粒pcDNA85btPA的构建及鉴定 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| ·以Ag85B编码基因构建DNA疫苗的选择 | 第41-42页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第42页 |
| ·信号肽tPA的选择 | 第42页 |
| 本章小结 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-45页 |
| 第二章 PEG化聚乙烯亚胺作为基因递释载体的研究 | 第45-79页 |
| 一、不同比例mPEG-PEI的合成和表征 | 第46-54页 |
| 1 材料与仪器 | 第46页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·不同修饰度的PEG-PEI的合成 | 第46-47页 |
| ·PEG-PEI的分离纯化 | 第47页 |
| ·TNBS法测定洗脱液中PEG-PEI的浓度 | 第47页 |
| ·凝胶色谱法分离PEG-PEI | 第47页 |
| ·PEG-PEI脱盐 | 第47页 |
| ·PEG-PEI的分子量以及修饰度测定 | 第47-48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-54页 |
| ·不同修饰度的PEG-PEI的合成 | 第48页 |
| ·PEG-PEI的分离纯化 | 第48-50页 |
| ·TNBS法测定洗脱液中PEG-PEI的浓度 | 第48-50页 |
| ·凝胶色谱和超滤法纯化PEG-PEI | 第50页 |
| ·PEG-PEI的分子量以及修饰度测定 | 第50-54页 |
| 二、不同PEG修饰度的PEI/DNA复合物的制备及性质考察 | 第54-63页 |
| 1.材料与仪器 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-56页 |
| ·质粒的提取 | 第55页 |
| ·PEI/DNA和PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第55页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第55页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第55页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第55页 |
| ·MTT法考察复合物的细胞毒性 | 第55-56页 |
| 3 结果和讨论 | 第56-63页 |
| ·PEI或PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第56页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第56-59页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第59-60页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第60-62页 |
| ·复合物的细胞毒性评价 | 第62-63页 |
| 三、不同PEG修饰度的PEI/DNA复合物的体内外转染效果评价 | 第63-76页 |
| 1 材料与仪器 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·仪器 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-66页 |
| ·各种PEI/DNA,PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第64页 |
| ·用于体外细胞转染的复合物的制备 | 第64页 |
| ·用于体内转染效果评价的复合物的制备 | 第64页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因评价体外细胞转染效率 | 第64-65页 |
| ·细胞的培养 | 第64-65页 |
| ·细胞的转染 | 第65页 |
| ·虫荧光素酶活性法评价复合物体外细胞转染效率 | 第65页 |
| ·动物给药方法 | 第65页 |
| ·组织切片方法定性评价复合物经动物鼻腔给药后绿色荧光蛋白报告基因在肺部的表达 | 第65页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第65-66页 |
| 3 结果和讨论 | 第66-76页 |
| ·PEI/DNA,PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第66-67页 |
| ·绿色荧光蛋白评价体外细胞转染效率 | 第67-69页 |
| ·虫荧光素酶活性法评价复合物体外细胞转染效率 | 第69-71页 |
| ·动物给药方法 | 第71-72页 |
| ·组织切片方法定性评价复合物经动物鼻腔给药后绿色荧光蛋白报告基因在肺部的表达 | 第72-73页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第73-74页 |
| ·PEI-PEG/DNA复合物体内外转染效果综合评价 | 第74-76页 |
| 本章小结 | 第76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 第三章 糖基修饰PEG化聚乙烯亚胺作为基因递释载体的研究 | 第79-110页 |
| 一、糖基—PEG—聚乙烯亚胺的合成和表征 | 第80-89页 |
| 1 材料与仪器 | 第80页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·仪器 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-82页 |
| ·PEI与NHS-PEG-MAL基团反应的特性 | 第80-81页 |
| ·Gala与NHS-PEG-MAL的连接 | 第81页 |
| ·不同糖基修饰的PEI的合成 | 第81-82页 |
| 3 结果和讨论 | 第82-89页 |
| ·糖基与基因转染材料的连接方法选择 | 第82页 |
| ·PEI中的氨基与NHS-PEG-MAL基团反应的特性 | 第82-85页 |
| ·Gala与NHS-PEG-MAL的连接 | 第85-87页 |
| ·Gala-PEG-PEI的合成 | 第87-89页 |
| 4 结论 | 第89页 |
| 二、Gala-PEG-PEI/DNA复合物的制备及性质考察 | 第89-96页 |
| 1.材料与仪器 | 第89页 |
| ·材料 | 第89页 |
| ·仪器 | 第89页 |
| 2 方法 | 第89-90页 |
| ·质粒的提取 | 第89页 |
| ·0.5%Gala-PEG-PEI/DNA,1%Gala-PEG-PEI/DNA,5%Gala-PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第89-90页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第90页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第90页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第90页 |
| ·MTT法考察复合物的细胞毒性 | 第90页 |
| 3 结果和讨论 | 第90-96页 |
| ·0.5%Gala-PEG-PEI/DNA,1%Gala-PEG-PEI/DNA,5%Gala-PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第91页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第91-93页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第93页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第93-95页 |
| ·复合物的细胞毒性评价 | 第95-96页 |
| 三、Gala-PEG-PEI/DNA复合物的体内外转染效果评价 | 第96-106页 |
| 1 材料与仪器 | 第96-97页 |
| ·材料 | 第96-97页 |
| ·仪器 | 第97页 |
| 2 方法 | 第97-99页 |
| ·各种PEI/DNA,Gala-PEG-PEI/DNA复合物的制备 | 第97页 |
| ·用于体外细胞转染的复合物的制备 | 第97页 |
| ·用于体内转染效果评价的复合物的制备 | 第97页 |
| ·体外细胞转染实验 | 第97-98页 |
| ·细胞的培养 | 第97-98页 |
| ·细胞的转染 | 第98页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因评价体外细胞转染效率 | 第98页 |
| ·虫荧光素酶活性法评价复合物体外细胞转染效率 | 第98页 |
| ·体内动物转染实验 | 第98-99页 |
| ·动物给药方法 | 第99页 |
| ·组织切片方法定性评价复合物经动物鼻腔给药后绿色荧光蛋白报告基因在肺部的表达 | 第99页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第99页 |
| 3 结果和讨论 | 第99-106页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因评价体外细胞转染效率 | 第99-101页 |
| ·虫荧光素酶活性法评价复合物体外细胞转染效率 | 第101-104页 |
| ·组织切片方法定性评价复合物经动物鼻腔给药后绿色荧光蛋白报告基因在肺部的表达 | 第104页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第104-106页 |
| ·Gala-PEG-PEI/DNA复合物体内外转染效果综合评价 | 第106页 |
| 本章小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 第四章 HIV-1 Tat蛋白修饰聚乙烯亚胺作为基因递释载体的研究 | 第110-129页 |
| 一、mPEG-Tat复合物的合成和Tat蛋白修饰的PEI/DNA复合物的制备及性质考察 | 第111-118页 |
| 1 材料与仪器 | 第111-112页 |
| ·材料 | 第111页 |
| ·仪器 | 第111-112页 |
| 2 方法 | 第112-114页 |
| ·PEG-Tat的合成 | 第112页 |
| ·Ellman法测定mPEG—MAL与Tat的反应程度 | 第112页 |
| ·PEI-PEG-1/PEG-Tat/DNA复合物的制备 | 第112-113页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第113页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第113-114页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第114页 |
| ·MTT法考察复合物的细胞毒性 | 第114页 |
| 3 结果和讨论 | 第114-118页 |
| ·mPEG-Tat的合成 | 第114页 |
| ·Ellman法测定mPEG—MAL与Tat的反应程度 | 第114-115页 |
| ·Tat蛋白修饰的PEI/DNA复合物的制备 | 第115页 |
| ·凝胶电泳阻滞分析 | 第115-116页 |
| ·复合物的包封率测定 | 第116-117页 |
| ·复合物粒径和zeta电位的测定 | 第117-118页 |
| ·复合物的细胞毒性评价 | 第118页 |
| 二、PEI-PEG-1/PEG-Tat/DNA复合物的体内外转染效果评价 | 第118-126页 |
| 1 材料与仪器 | 第118-119页 |
| ·材料 | 第119页 |
| ·仪器 | 第119页 |
| 2 方法 | 第119-120页 |
| ·各种PEI/DNA,PEI-PEG-1/PEG-Tat/DNA复合物的制备 | 第119页 |
| ·用于体外细胞转染的复合物的制备 | 第119页 |
| ·用于体内转染效果评价的复合物的制备 | 第119页 |
| ·细胞培养 | 第119页 |
| ·细胞的转染 | 第119-120页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第120页 |
| 3 结果和讨论 | 第120-126页 |
| ·虫荧光素酶活性法评价复合物体外细胞转染效率 | 第120-122页 |
| ·虫荧光素酶活性法定量评价复合物经动物鼻腔给药后虫荧光素酶报告基因在肺部的表达 | 第122-123页 |
| ·PEI-PEG-1/PEG-Tat/DNA复合物体内外转染效果综合评价 | 第123-126页 |
| 本章小结 | 第126页 |
| 参考文献 | 第126-129页 |
| 第五章 修饰的PEI/pcDNA85btPA复合物免疫效果的初步评价 | 第129-140页 |
| 1 材料和仪器 | 第129-130页 |
| 2 方法 | 第130-131页 |
| ·动物免疫及样品收集 | 第130页 |
| ·免疫学评价 | 第130-131页 |
| ·ELISA检测血清IgG、鼻洗液IgA | 第130页 |
| ·特异性淋巴细胞增殖实验 | 第130页 |
| ·特异性IFN-γ的诱导和测定 | 第130-131页 |
| 3 实验结果 | 第131-133页 |
| ·血清Ag85B抗体的水平 | 第131-132页 |
| ·特异性淋巴细胞增殖实验 | 第132-133页 |
| ·特异性IFN-γ的水平 | 第133页 |
| 4 讨论 | 第133-138页 |
| ·DNA疫苗 | 第133-135页 |
| ·免疫途径 | 第135-136页 |
| ·载体 | 第136-137页 |
| ·检测指标 | 第137-138页 |
| 本章小结 | 第138页 |
| 参考文献 | 第138-140页 |
| 第六章 修饰的PEI/DNA复合物鼻腔给药的生理适应性研究 | 第140-147页 |
| 1 材料和仪器 | 第140页 |
| ·材料 | 第140页 |
| ·仪器 | 第140页 |
| 2 方法 | 第140-142页 |
| ·动物给药 | 第140-141页 |
| ·石蜡包埋切片的制作 | 第141-142页 |
| 3 结果和讨论 | 第142-146页 |
| 参考文献 | 第146-147页 |
| 总结 | 第147-149页 |
| 创新和发现 | 第149-150页 |
| 后续工作及展望 | 第150-151页 |
| 第二部分 苯甲酸利扎曲普坦鼻腔喷雾剂的研制及脑内递药特性研究 | 第151-208页 |
| 前言 | 第151-154页 |
| 参考文献 | 第152-154页 |
| 第一章 苯甲酸利扎曲普坦鼻腔喷雾剂的研制及质量评价 | 第154-169页 |
| 1 材料与仪器 | 第154-155页 |
| ·材料 | 第154页 |
| ·仪器 | 第154-155页 |
| 2 实验方法 | 第155-157页 |
| ·处方设计和筛选 | 第155页 |
| ·影响因素试验 | 第155页 |
| ·RIZA含量分析方法的建立 | 第155-156页 |
| ·溶液配制 | 第155-156页 |
| ·含量测定方法 | 第156页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂的质量评价 | 第156-157页 |
| ·性状 | 第156页 |
| ·鉴别 | 第156页 |
| ·化学鉴别反应 | 第156页 |
| ·HPLC保留时间鉴别 | 第156页 |
| ·pH值 | 第156页 |
| ·装量差异 | 第156页 |
| ·每瓶总喷次 | 第156页 |
| ·每喷主药含量 | 第156页 |
| ·有关物质 | 第156-157页 |
| ·40℃加速试验 | 第157页 |
| 3 结果 | 第157-167页 |
| ·处方筛选 | 第157页 |
| ·影响因素试验结果 | 第157-158页 |
| ·制剂处方及工艺 | 第158页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂处方 | 第158页 |
| ·制备工艺 | 第158页 |
| ·含量测定和降解产物测定方法及其评价 | 第158-164页 |
| ·色谱条件 | 第158页 |
| ·方法专属性 | 第158-159页 |
| ·降解产物的干扰情况 | 第159-162页 |
| ·线性关系试验 | 第162-163页 |
| ·检出限 | 第163页 |
| ·回收率 | 第163页 |
| ·精密度 | 第163-164页 |
| ·稳定性 | 第164页 |
| ·质量评价结果 | 第164-166页 |
| ·外观性状结果 | 第164页 |
| ·鉴别 | 第164-165页 |
| ·化学鉴别反应结果 | 第164页 |
| ·HPLC保留时间测定结果 | 第164-165页 |
| ·pH值测定结果 | 第165页 |
| ·装量差异 | 第165页 |
| ·每瓶总喷次检查结果 | 第165-166页 |
| ·每喷主药含量测定结果 | 第166页 |
| ·有关物质测定结果 | 第166页 |
| ·含量测定结果 | 第166页 |
| ·40℃加速试验结果 | 第166-167页 |
| 4 讨论 | 第167-168页 |
| ·色谱条件选择 | 第167页 |
| ·处方筛选 | 第167-168页 |
| ·有效期的确定 | 第168页 |
| 参考文献 | 第168-169页 |
| 第二章 苯甲酸利扎曲普坦鼻腔喷雾剂的安全性评价 | 第169-177页 |
| 1 材料与仪器 | 第169页 |
| ·材料 | 第169页 |
| ·仪器 | 第169页 |
| ·动物 | 第169页 |
| 2 实验方法 | 第169-170页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂对蟾蜍上颚粘膜纤毛运动的影响 | 第169-170页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂对大鼠鼻粘膜及纤毛形态的影响 | 第170页 |
| 3 实验结果 | 第170-175页 |
| ·鼻腔喷雾剂对蟾蜍上颚粘膜纤毛运动的影响 | 第170-171页 |
| ·鼻腔喷雾剂对大鼠鼻粘膜及纤毛形态的影响 | 第171-175页 |
| ·结论 | 第175页 |
| 4 讨论 | 第175页 |
| ·实验方法的选择 | 第175页 |
| ·给药体积的选择 | 第175页 |
| 参考文献 | 第175-177页 |
| 第三章 苯甲酸利扎曲普坦鼻腔喷雾剂的人体生物利用度研究 | 第177-193页 |
| 1 材料与仪器 | 第177-178页 |
| ·材料 | 第177页 |
| ·仪器 | 第177-178页 |
| 2 方法 | 第178-180页 |
| ·人血药浓度测定方法的建立及其评价 | 第178-179页 |
| ·溶液配制 | 第178页 |
| ·RIZA对照溶液的配制 | 第178页 |
| ·内标佐米曲普坦溶液的配制 | 第178页 |
| ·色谱条件 | 第178页 |
| ·血样预处理 | 第178页 |
| ·标准曲线 | 第178页 |
| ·随行标准血样处理 | 第178页 |
| ·方法灵敏度 | 第178-179页 |
| ·提取回收率 | 第179页 |
| ·方法回收率 | 第179页 |
| ·精密度 | 第179页 |
| ·样品的稳定性 | 第179页 |
| ·样品存放期间的稳定性 | 第179页 |
| ·样品冻融稳定性 | 第179页 |
| ·样品重组后的稳定性 | 第179页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂人体生物利用度试验 | 第179-180页 |
| ·研究对象 | 第179页 |
| ·给药方案和血样采集 | 第179-180页 |
| 3 实验结果 | 第180-191页 |
| ·受试者血药浓度侧定方法及其评价 | 第180-184页 |
| ·方法专一性 | 第180-181页 |
| ·血药浓度标准曲线方程 | 第181-182页 |
| ·方法灵敏度 | 第182页 |
| ·提取回收率 | 第182-183页 |
| ·方法回收率和天内、天间精密度 | 第183-184页 |
| ·样品的稳定性 | 第184页 |
| ·RIZA鼻腔喷雾剂人体生物利用度研究 | 第184-191页 |
| ·血药浓度—时间数据 | 第184-189页 |
| ·主要药动学参数 | 第189页 |
| ·生物等效性评价 | 第189-191页 |
| 4 讨论 | 第191页 |
| ·测定方法 | 第191页 |
| ·鼻腔喷雾剂的优点和耐受性 | 第191页 |
| 参考文献 | 第191-193页 |
| 第四章 苯甲酸利扎曲普坦的脑内递药特性研究 | 第193-208页 |
| 1 材料与仪器 | 第193-194页 |
| ·材料 | 第193页 |
| ·仪器 | 第193-194页 |
| ·动物 | 第194页 |
| 2 方法 | 第194-195页 |
| ·大鼠体内分析方法的建立 | 第194页 |
| ·溶液配制 | 第194页 |
| ·RIZA对照溶液的配制 | 第194页 |
| ·内标佐米曲普坦溶液的配制 | 第194页 |
| ·生物样品预处理 | 第194页 |
| ·色谱条件 | 第194页 |
| ·RIZA鼻腔给药的脑内递药特性研究 | 第194-195页 |
| ·数据处理 | 第195页 |
| 3 结果 | 第195-205页 |
| ·大鼠体内分析方法及其评价 | 第195-201页 |
| ·专一性 | 第195-197页 |
| ·标准曲线 | 第197-198页 |
| ·血浆标准曲线 | 第197-198页 |
| ·CSF标准曲线 | 第198页 |
| ·方法回收率 | 第198-199页 |
| ·提取回收率 | 第199页 |
| ·精密度 | 第199-200页 |
| ·检测限 | 第200-201页 |
| ·RIZA鼻腔给药的脑内递药特性研究结果 | 第201-205页 |
| ·不同途径给药后RIZA血药和脑脊液—时间数据 | 第201-204页 |
| ·三种途径给药后RIZA体内的药动学分析与评价 | 第204-205页 |
| ·鼻腔给药后脑内递药特性评价结果 | 第205页 |
| 4 讨论 | 第205-207页 |
| ·脑脊液连续采集方法 | 第205页 |
| ·动物的麻醉 | 第205页 |
| ·大鼠口服给药后的绝对生物利用度 | 第205-206页 |
| ·药物经鼻给药后的两种入脑途径和RIZA脑内递药特性的分析 | 第206-207页 |
| 参考文献 | 第207-208页 |
| 论文创新性 | 第208-209页 |
| 综述 | 第209-224页 |
| 致谢 | 第224-225页 |
| 已发表文章 | 第225-227页 |
