| 表格目录 | 第1-7页 |
| LIST OF TABLES | 第7-8页 |
| 插图目录 | 第8-9页 |
| LIST OF FIGURE | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章：文献综述—植物病毒运动蛋白的分子生物学研究进展 | 第14-25页 |
| 1.运动蛋白的类型及特点 | 第14-16页 |
| 2.运动蛋白介导的病毒细胞间运动方式 | 第16-17页 |
| ·以病毒核酸与运动蛋白形成核糖核蛋白复合体的形式通过胞间连丝 | 第16-17页 |
| ·以病毒粒子的形式完成胞间运动 | 第17页 |
| 3.运动蛋白介导病毒细胞内和细胞间运动的分子机制 | 第17-20页 |
| ·运动蛋白与病毒核酸的相互作用 | 第17-18页 |
| ·运动蛋白与胞间连丝的相互作用 | 第18-19页 |
| ·运动蛋白与细胞骨架的相互作用 | 第19页 |
| ·运动蛋白与寄主细胞PME的相互作用 | 第19-20页 |
| 4.运动蛋白在病毒长距离运输中的作用 | 第20-21页 |
| 5.运动蛋白介导的植物抗病性 | 第21-25页 |
| 第二章：中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆、表达及其抗血清制备 | 第25-41页 |
| 材料与方法 | 第25-35页 |
| 1.实验材料 | 第25-26页 |
| ·病样 | 第26页 |
| ·菌株与载体 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·PCR引物 | 第26页 |
| 2.实验方法 | 第26-35页 |
| ·总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第27页 |
| ·MP基因的PCR扩增 | 第27页 |
| ·PCR产物的切胶纯化 | 第27-28页 |
| ·克隆载体pGEM-MP的构建 | 第28-29页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞制备 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆DNA的制备 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆PCR检测 | 第29页 |
| ·DNA序列测定 | 第29页 |
| ·原核表达载体pSBET-MP的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| ·酶切与回收目的基因和表达载体片段 | 第29-30页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接 | 第30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30页 |
| ·IPTG诱导表达 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE检测目的基因的表达 | 第30-31页 |
| ·抗血清制备 | 第31-33页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第31-32页 |
| ·免疫小鼠制备抗血清 | 第32-33页 |
| ·吸附去除非目的蛋白产生的抗体 | 第33页 |
| ·Western blot检测抗血清纯度 | 第33-35页 |
| ·SDS-PAGE | 第33页 |
| ·Western blot | 第33-35页 |
| ·ELISA测定抗血清的效价 | 第35页 |
| 结果与分析 | 第35-39页 |
| 1.RT-PCR扩增CWMV的MP基因 | 第35-36页 |
| 2.MP基因的克隆与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.原核表达载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 4.MP基因原核表达产物的SDS—PAGE分析 | 第38-39页 |
| 5.MP抗血清western blot检测及效价测定 | 第39页 |
| 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章：小麦酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选 | 第41-63页 |
| 材料与方法 | 第42-53页 |
| 1.实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| 2.实验方法 | 第43-53页 |
| ·小麦cDNA文库的构建 | 第44-49页 |
| ·Total RNA的提取与检测 | 第44页 |
| ·Trizol提取总RNA | 第44页 |
| ·RNA样品OD值检测 | 第44页 |
| ·RNA电泳检测 | 第44页 |
| ·纯化mRNA | 第44页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第44-45页 |
| ·LD PCR合成和扩增ds cDNA | 第45-46页 |
| ·酵母表型鉴定 | 第46页 |
| ·酵母感受态细胞制备(LiAc法) | 第46页 |
| ·ds cDNA和pGADT7-Rec共转化酵母菌株 | 第46-47页 |
| ·文库菌的获得 | 第47-49页 |
| ·文库质量检测 | 第49页 |
| ·文库的独立克隆数 | 第49页 |
| ·文库滴度 | 第49页 |
| ·文库质粒插入片段长度检测 | 第49页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-MP的构建及其在酵母中的表达检测 | 第49-51页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-MP的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| ·酶切原核表达质粒pSBET-MP和酵母双杂交载体pGBKT7 | 第49-50页 |
| ·目的基因片段与表达载体的连接和转化 | 第50页 |
| ·酵母转化(电击法) | 第50页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第50页 |
| ·电击转化 | 第50页 |
| ·酵母总蛋白抽提(尿素／SDS法) | 第50-51页 |
| ·Western blot检测融合蛋白表达 | 第51页 |
| ·自激活检测 | 第51页 |
| ·文库筛选 | 第51-53页 |
| ·酵母匹配筛选 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆的初步鉴定 | 第52页 |
| ·回转实验 | 第52-53页 |
| ·文库质粒测序 | 第53页 |
| 结果与分析 | 第53-59页 |
| 1.小麦cDNA文库构建 | 第53-55页 |
| ·小麦总RNA的质量鉴定 | 第53-54页 |
| ·纯化的mRNA的质量鉴定 | 第54页 |
| ·LD PCR扩增的ds cDNA的质量鉴定 | 第54页 |
| ·酵母表型鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·小麦cDNA文库质量评定 | 第55页 |
| ·文库独立克隆数 | 第55页 |
| ·文库滴度 | 第55页 |
| ·PCR检测文库质粒插入片段 | 第55页 |
| 2.“诱饵”质粒pGBKT7-MP的构建及其在酵母中的表达检测 | 第55-57页 |
| ·重组质粒pGBKT7-MP的鉴定 | 第55-56页 |
| ·电击转化酵母菌Y187 | 第56页 |
| ·酵母双杂交载体pGBKT7-MP在酵母菌Y187中的表达分析 | 第56-57页 |
| ·自激活排除 | 第57页 |
| 3.文库筛选 | 第57-59页 |
| ·文库菌AH109与Y187／pGBKT7的结合效率 | 第57页 |
| ·文库的初步筛选 | 第57-58页 |
| ·回转实验 | 第58-59页 |
| ·测序结果及分析 | 第59页 |
| 讨论 | 第59-63页 |
| 1.文库构建 | 第60-61页 |
| 2.文库筛选 | 第61-63页 |
| 第四章：主要结论与进一步研究建议 | 第63-65页 |
| 1.主要结论 | 第63页 |
| 2.进一步研究建议 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
