| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-27页 |
| 1 植物抗病基因的研究进展 | 第9-22页 |
| ·植物的抗病机制 | 第9-11页 |
| ·植物的专化抗病性 | 第9-10页 |
| ·植物的诱导抗性 | 第10页 |
| ·防卫基因 | 第10-11页 |
| ·植物的病程相关蛋白 | 第11-12页 |
| ·PRs蛋白的分类 | 第11页 |
| ·PRs的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·植物抗病基因 | 第12-15页 |
| ·植物抗病基因克隆的方法 | 第15-18页 |
| ·转座子标签技术 | 第15页 |
| ·图位克隆 | 第15-16页 |
| ·基于同源序列的候选基因法 | 第16-18页 |
| ·其它方法 | 第18页 |
| ·分离差异表达基因的方法 | 第18-22页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第18-19页 |
| ·代表性差异分析 | 第19页 |
| ·抑制差减杂交 | 第19-20页 |
| ·cDNA微阵列和基因芯片 | 第20-22页 |
| 2 小麦黄矮病研究进展 | 第22-26页 |
| ·小麦黄矮病概述 | 第22-23页 |
| ·大麦黄矮病毒概述 | 第23-24页 |
| ·小麦黄矮病抗性基因及其来源 | 第24-25页 |
| ·黄矮病抗性基因的遗传规律 | 第25-26页 |
| 3 立题意义及技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系cDNA文库的筛选 | 第27-44页 |
| 1 材料与方法 | 第29-37页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·宿主菌XL1-Blue MRF’的制备 | 第29页 |
| ·cDNA文库滴度测定 | 第29-30页 |
| ·辅助噬菌体滴度测定 | 第30页 |
| ·辅助噬菌体扩增 | 第30-31页 |
| ·集群内删除 | 第31页 |
| ·转化为双链RF pBluescript cDNA | 第31-32页 |
| ·从质粒cDNA文库中大量制备单链质粒DNA | 第32页 |
| ·生物素标记反应 | 第32-33页 |
| ·cDNA捕获杂交 | 第33-35页 |
| ·捕获产物的PCR扩增 | 第35页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第35-36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·电击转化 | 第36页 |
| ·菌落PCR | 第36-37页 |
| ·插入片段大小的酶切检测 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-42页 |
| ·文库滴度测定及辅助噬菌体扩增及集群内删除 | 第37-38页 |
| ·生物素标记反应 | 第38页 |
| ·捕获产物PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增产物的克隆 | 第39页 |
| ·插入片段大小的酶切检测 | 第39-40页 |
| ·快速鉴定重组子 | 第40页 |
| ·序列分析 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 差减文库的构建与初步筛选 | 第44-57页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-52页 |
| ·DNA的提取(酚-氯仿法) | 第44-45页 |
| ·RsaI酶切 | 第45页 |
| ·接头连接 | 第45-46页 |
| ·第一次杂交 | 第46-47页 |
| ·第二次杂交 | 第47页 |
| ·PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·PCR产物纯化 | 第48-49页 |
| ·连接 | 第49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·连接产物的电击转化 | 第49页 |
| ·菌落PCR | 第49-50页 |
| ·Southern印迹 | 第50页 |
| ·探针标记 | 第50-51页 |
| ·预杂交和杂交反应 | 第51-52页 |
| ·洗脱 | 第52页 |
| ·膜上探针去除 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-56页 |
| ·RsaI酶切 | 第52-53页 |
| ·抑制性PCR | 第53页 |
| ·差减文库构建 | 第53-54页 |
| ·差异筛选 | 第54-55页 |
| ·Southern杂交 | 第55页 |
| ·TSH-1的序列分析 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系TAC文库的筛选 | 第57-64页 |
| 1 材料与方法 | 第59-60页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60页 |
| ·克隆池PCR(Pooled PCR) | 第60页 |
| ·特异分子标记SC-gp1 PCR反应条件 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-63页 |
| ·初级克隆池的筛选 | 第60-61页 |
| ·次级克隆池的筛选 | 第61页 |
| ·次次级克隆池的筛选 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 全文总结及本研究的创新性 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 附录Ⅰ 缩写词表 | 第76-77页 |
| 附录Ⅱ 本文涉及的载体及其结构 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |
